抗癲癇藥對(duì)大鼠認(rèn)知及海馬GluR2和Syn表達(dá)的影響.pdf

1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?br>　　 癲癇是大腦神經(jīng)元過度同步異常放電導(dǎo)致的神經(jīng)系統(tǒng)功能異常綜合征，是腦的原發(fā)病中最常見的一種，也是兒童時(shí)期常見的慢性中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾患之一。我國(guó)癲癇的患病率為0.70％，兒童癲癇大多起病于學(xué)齡前期，7歲以內(nèi)占小兒癲癇的82.2％，以1歲以內(nèi)最高。
　　 目前抗癲癇治療主要依靠長(zhǎng)期口服抗癲癇藥(antiepilepticdrugs,AEDs)控制發(fā)作為主，通常需要3～5年以上的時(shí)間，有的甚至需要終身服藥?？拱d癇

2、治療主張合理用藥，提倡單藥治療。主要治療目標(biāo)是完全控制發(fā)作，同時(shí)避免或減少不良反應(yīng)的發(fā)生，以提高患者生活質(zhì)量。臨床研究證明約70％～80％的患兒通過合理正規(guī)服用抗癲癇藥物，發(fā)作可以得到完全控制。但長(zhǎng)期應(yīng)用AEDs可引起一系列的毒副作用，尤其是對(duì)認(rèn)知的損害，日益受到人們的關(guān)注。認(rèn)知是大腦的高級(jí)神經(jīng)活動(dòng)，包括理解、記憶、學(xué)習(xí)能力、注意力、警覺性和知覺等。AEDs因?qū)Σ∽儾课簧窠?jīng)元的興奮性和維持正常認(rèn)知功能神經(jīng)元的興奮性有同樣的降低作用，故可

3、導(dǎo)致一定程度上的認(rèn)知損害。兒童處于生長(zhǎng)發(fā)育階段，器官發(fā)育尚不完善，各個(gè)系統(tǒng)的功能尚不健全，較成人更易受藥物影響。托吡酯對(duì)詞語流暢、注意力、信息加工速度和語言技巧，感知覺、操作記憶等均有影響，已被大家所公認(rèn)，亦有報(bào)道丙戊酸鈉可影響認(rèn)知。奧卡西平是一種無活性前體物，在肝臟快速被胞質(zhì)酶還原成有藥理活性的單羥基衍生物（MHD）進(jìn)而阻斷電壓依賴性鈉通道發(fā)揮作用。目前研究表明，奧卡西平無論是單藥治療還是作為添加治療，對(duì)認(rèn)知功能無明顯影響。左乙拉西坦

4、屬吡咯烷酮衍生物，為吡拉西坦類似物，是一種新型抗癲癇藥物，具有廣譜、起效迅速的抗癲癇活性，其作用機(jī)制尚未完全明了，新近研究發(fā)現(xiàn)腦內(nèi)突觸囊泡蛋白SV2A是其發(fā)揮抗癲癇作用的獨(dú)特位點(diǎn)。目前國(guó)內(nèi)外研究認(rèn)為左乙拉西坦對(duì)認(rèn)知功能無不良影響。
　　 目前AEDs對(duì)認(rèn)知功能影響的研究，無論是動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，還是成人和兒童患者門診隨診觀察，主要是通過行為學(xué)測(cè)試和一些智力行為量表檢查，尚未有通過觀察腦組織病理結(jié)構(gòu)的改變來研究AEDs對(duì)認(rèn)知功能影響的報(bào)道

5、。并且目前研究主要針對(duì)單藥治療，聯(lián)合用藥鮮有報(bào)道。
　　 突觸是神經(jīng)元間信息傳遞的媒介，突觸可塑性被認(rèn)為是學(xué)習(xí)和記憶的電生理指標(biāo)，突觸丟失及功能損傷與認(rèn)知功能下降最具有直接關(guān)系。谷氨酸受體2（glutamatereceptor2,GluR2）是AMPA受體的一種亞基，是突觸后膜的重要組成部分；突觸體素(synaptophysin,Syn)又稱突觸小泡蛋白，是突觸囊泡特異性膜蛋白，是突觸前膜的標(biāo)志物。本實(shí)驗(yàn)將丙戊酸鈉、奧卡西平、左

6、乙拉西坦單藥治療，以及左乙拉西坦與前兩者分別聯(lián)合應(yīng)用于幼年直至成年期的Wistar大鼠，意在觀察AEDs單獨(dú)應(yīng)用以及聯(lián)合應(yīng)用對(duì)大鼠認(rèn)知功能的影響。通過行Moriss水迷宮和穿梭箱實(shí)驗(yàn)測(cè)試比較各組大鼠的空間性和條件性學(xué)習(xí)記憶能力，應(yīng)用免疫組化技術(shù)檢測(cè)海馬GluR2和Syn的表達(dá)，將行為學(xué)測(cè)試和腦組織病理檢查相結(jié)合，來研究AEDs對(duì)大鼠認(rèn)知功能的影響，為AEDs臨床應(yīng)用奠定基礎(chǔ)，為預(yù)防和減少AEDs引起的副作用提供科學(xué)依據(jù)，提高服藥的依從性

7、，改善癲癇患者的生活質(zhì)量。
　　 實(shí)驗(yàn)方法：
　　 (1)建立長(zhǎng)期應(yīng)用AEDs的Wistar大鼠模型，健康Wistar大鼠60只（山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供），雌雄不拘，鼠齡21～22d，體重48～58g，隨機(jī)分為6組，每組10只，即對(duì)照組(CON組)、丙戊酸鈉組(VPA組)、左乙拉西坦組(LEV組)、奧卡西平組(OXC組)、左乙拉西坦+丙戊酸鈉組（L+V組）、左乙拉西坦+奧卡西平組（L+0組）。按照分組給藥，劑量分別為：

8、對(duì)照組生理鹽水lOml/(kg,d)，VPA組VPA200mg/(kg.d),LEV組LEVI00mg/(kg.d),OXC組OXClOOmg/(kg.d),L+V組LEVlOOmg/(kg.d)+VPA200mg/(kg.d),L+O組LEVlOOmg/(kg.d)+OXClOOmg/(kg.d)。灌胃給藥，2次/d，連續(xù)90d。給藥期間，每周稱重1次，根據(jù)體重調(diào)整劑量。
　　 (2)Moriss水迷宮測(cè)試逃避潛伏期、正確率、

9、運(yùn)行時(shí)間和穿梭箱實(shí)驗(yàn)測(cè)試主動(dòng)回避次數(shù)、主動(dòng)回避潛伏期、被動(dòng)回避潛伏期，比較各組大鼠的空間和條件性學(xué)習(xí)記憶能力。
　　 (3)行為學(xué)測(cè)試結(jié)束后，苯巴比妥鈉腹腔麻醉，斷頭取腦，留取海馬，多聚甲醛固定，石蠟包埋，連續(xù)冠狀切片，片厚5μm，免疫組化技術(shù)檢測(cè)海馬GluR2和Syn的表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 (1)長(zhǎng)期應(yīng)用AEDs的大鼠模型：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物一般情況良好，活動(dòng)、攝食等情況良好，無死亡現(xiàn)象。
　　 (2)與對(duì)

10、照組比較，VPA組水迷宮測(cè)試逃避潛伏期、正確率、運(yùn)行時(shí)間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，穿梭箱主動(dòng)回避次數(shù)、主動(dòng)回避潛伏期、被動(dòng)回避潛伏期差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，其余各組各項(xiàng)指標(biāo)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　 (3)與對(duì)照組比較，免疫組化檢測(cè)顯示LEV組、OXC組、L+O組GluR2和Syn的表達(dá)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>O.05)；VPA組GIuR2和Syn的表達(dá)均顯著下降(P<0.05)；L+V組的Glu

11、R2表達(dá)顯著下降(P0.05）。
　　 結(jié)論：
　　 LEV、OXC、L+O、L+V不影響認(rèn)知功能，VPA影響認(rèn)知功能可能與其使GluR2和Syn的表達(dá)下降有關(guān)。
　　 創(chuàng)新性和意義：
　　 (1)本研究的創(chuàng)新點(diǎn)是首先在國(guó)內(nèi)把腦組織病理結(jié)構(gòu)與行為學(xué)測(cè)試相結(jié)合的方法來研究AEDs對(duì)Wistar大鼠認(rèn)知功能影響，這為研究臨床應(yīng)用AEDs的副作用提供了理論依據(jù)。<