小凹與小凹蛋白-1介導ox-LDL的攝取及跨內(nèi)皮轉(zhuǎn)運.pdf

1、目的：研究氧化低密度脂蛋白跨內(nèi)皮細胞轉(zhuǎn)運的方式，試圖揭示caveolae在膽固醇流出中的作用機制，并探討caveolin-1與內(nèi)皮細胞膽固醇攝取間存在的關系，尋找是否存在調(diào)節(jié)關系。 方法：用40μg/ml氧化低密度脂蛋白處理人臍靜脈內(nèi)皮細胞不同時間，分別用熒光和HPLC觀察細胞內(nèi)膽固醇含量變化；隨后將已用氧化低密度脂蛋白荷脂的人臍靜脈內(nèi)皮細胞，撤去氧化低密度脂蛋白后再觀察細胞內(nèi)膽固醇含量變化。分別用三種caveolae阻滯劑ca

2、rrageenan、filipin、nocodazole預處理人臍靜脈內(nèi)皮細胞1h后與40μg/ml氧化低密度脂蛋白孵育24h，用熒光倒置顯微鏡觀察內(nèi)皮細胞荷脂情況。將人臍靜脈內(nèi)皮細胞種植于transwell培養(yǎng)系統(tǒng)套皿上層，分別用三種阻滯劑預處理細胞1h后加入40μg/mlDiI熒光標記的氧化低密度脂蛋白于套皿上層孵育24h，取套皿下層液體用熒光分光光度計測熒光值。用FITC標記LOX-1后，用nocodazole阻滯cavolae運

3、動，用熒光倒置顯微鏡觀察LOX-1的運動情況。利用caveolin-1 SiRNA干擾技術沉默內(nèi)皮細胞caveolin-1表達，同時檢測內(nèi)皮細胞在氧化低密度脂蛋白作用下NF-κB和LOX-1的表達情況。 結(jié)果：實驗表明人臍靜脈內(nèi)皮細胞與氧化低密度脂蛋白孵育時，細胞荷脂呈時間依賴性增加，撤去氧化低密度脂蛋白后細胞內(nèi)脂質(zhì)逐漸減少。Caveolae阻滯劑可明顯阻滯內(nèi)皮細胞對ox-LDL攝取，同時也可明顯阻滯氧化低密度脂蛋白跨內(nèi)皮細胞轉(zhuǎn)

4、運達49％, 72％ 和 80％。免疫熒光結(jié)果表明LOX-1定位于caveolae中。SiRNA干擾實驗表明沉默caveolin-1表達后，抑制了NF-κB核轉(zhuǎn)位，同時LOX-1表達下調(diào)。 結(jié)論： 1.內(nèi)皮細胞可攝取ox-LDL而荷脂，也可自發(fā)性流出所荷脂質(zhì)。內(nèi)皮細胞的ox-LDL受體-LOX-1-定位于caveolae中，caveolae在內(nèi)皮細胞攝取ox-LDL的過程中起了一個運載體的作用，它同時也介導了ox-LD