微生物拆分硫辛酸中間體6-羥基-8-氯辛酸乙酯.pdf

1、利用生物催化技術(shù)來合成手性化合物，其反應條件溫和，選擇性強，副反應少，收率相對較高，光學純度高，環(huán)境污染較少，生產(chǎn)成本較低，因此受到越來越多的關(guān)注。本文對脂肪酶水解拆分外消旋的硫辛酸中間體6-羥基-8-氯辛酸乙酯制備(R)-6-羥基-8-氯辛酸乙酯進行了研究，摘要如下： 對本實驗室保藏的33株微生物菌株以及市售的8種活性干酵母進行了篩選，建立了土壤中篩選的方法，篩選到了一株能夠選擇性拆分硫辛酸中間體6-羥基-8-氯辛酸乙酯的微生

2、物菌株T4，并對該菌進行了初步鑒定，為革蘭氏陰性，產(chǎn)脂肪酶短桿菌。 確定了產(chǎn)脂肪酶菌株T4的酶活定義及測定方法，并在搖瓶中對T4菌株的發(fā)酵產(chǎn)酶條件進行了優(yōu)化，篩選了發(fā)酵培養(yǎng)基中的碳源和氮源，確定了發(fā)酵培養(yǎng)基(g/L)：甘油40，豆餅粉20，蛋白胨5，尿素5，KH2PO45，MgSO4·7H2O1。發(fā)酵初始的pH為8.0，發(fā)酵溫度為37℃，發(fā)酵時間為24h。 優(yōu)化了微生物產(chǎn)酶菌株T4拆分外消旋6-羥基-8-氯辛酸乙酯水解反

3、應的反應條件，確定了該菌株催化拆分的最適反應溫度為30℃，反應體系最適pH為7.0，最適搖床轉(zhuǎn)速為170r/min?？疾榱颂砑觿┑挠绊?，確定了有效表面活性劑為CTAB。在此優(yōu)化條件下反應8h，水解率和e.e.值分別為72.7％和92.8％，產(chǎn)率為27.3％。并利用6-羥基-8-氯辛酸乙酯和6-羥基-8-氯辛酸在不同pH下的溶解度不同，對轉(zhuǎn)化液進行了初步分離，得到了(R)-6-羥基-8-氯辛酸乙酯，純度為89.4％，粗品產(chǎn)率為31.5％。

4、 考查了微生物產(chǎn)酶菌株T4凍干細胞在水/有機溶劑兩相體系中進行的催化反應，篩選得到反應介質(zhì)有機溶劑正辛烷，并考察了其與水相的相體積比為1/1時有利于催化反應的進行。在水/有機溶劑兩相體系的催化反應增加了底物的溶解性，比較適宜的底物濃度是45mmol/L～70mmol/L。水/有機溶劑兩相體系中的反應進程明顯快于水相中反應，當反應進行到6h的時候，此時的水解率為76.3％，e.e.值為91.3％，而水相中當反應進行到8h的時候，水