不明原因早期復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)與殺傷細(xì)胞免疫球蛋白樣受體及其HLA-C配體的關(guān)聯(lián)性研究.pdf

1、第一部分殺傷細(xì)胞免疫球蛋白樣受體及其HLA-C配體基因與不明原因早期復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)的關(guān)聯(lián)性研究第一節(jié)不明原因早期復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)患者夫婦雙方殺傷細(xì)胞免疫球蛋白樣受體及其HLA-C配體基因多態(tài)性的研究 目的：復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)(recurrent spontaneous abortion，RSA)病因復(fù)雜，其中近1/2原因不明，其免疫發(fā)病機(jī)理尚不清楚，近年來，母胎界面上自然殺傷細(xì)胞(NK細(xì)胞)的作用受到人們關(guān)注，NK細(xì)胞的功能主要通過其

2、表面受體與靶細(xì)胞表面配體結(jié)合來調(diào)節(jié)，殺傷細(xì)胞免疫球蛋白樣受體(killer cell immunoglobulin-like receptors，KIR)主要存在于NK細(xì)胞和部分T細(xì)胞表面，通過與靶細(xì)胞表面HLA配體識(shí)別調(diào)節(jié)NK細(xì)胞功能，編碼KIR及其HLA配體的基因在人群中均具有高度多態(tài)性，本研究的目的是通過研究KIR及其HLA-C配體基因多態(tài)性與不明原因的早期復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)是否存在關(guān)聯(lián)，探討免疫遺傳因素在RSA發(fā)病中的作用。

3、 方法：篩選2004年2月-2007年1月我院就診的73對(duì)不明原因的早期復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)患者夫婦，隨機(jī)選取我院保健門診進(jìn)行健康查體的志愿者夫婦68對(duì)作為對(duì)照者，用序列特異性引物聚合酶鏈反應(yīng)(PCR/SSP)法，對(duì)每對(duì)入選者進(jìn)行15種KIR基因和8種HLA-C基因位點(diǎn)的檢測(cè)，比較RSA患者和正常對(duì)照者間KIR和HLA-C基因頻率及分布有無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 結(jié)果：1.RSA病例組KIR2DS1基因陽(yáng)性率較對(duì)照組顯著升高(P=0.029)。

4、2.RSA病例組活化性KIR基因平均數(shù)較對(duì)照組顯著升高(P=0.041)。3.RSA病例組中攜帶2個(gè)以上活化性KIR基因的個(gè)體較對(duì)照組明顯增多，差異具有顯著性(P=0.018)。4.RSA病例組中雙方均檢測(cè)到HLA-C第2組等位基因(Cw分子α重鏈上第80位為賴氨酸)的夫婦顯著少于對(duì)照組，而RSA病例組中雙方均未檢測(cè)到HLA-C第2組等位基因的夫婦顯著多于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.005)。5.女方KIR2DL1基因陽(yáng)性且夫婦雙

5、方都具有第2組Cw等位基因的患者顯著少于對(duì)照者(P=0.007)，女方KIR2DS1基因陽(yáng)性且夫婦雙方都具有第2組Cw等位基因的患者顯著少于對(duì)照者(P=0.002)。6.KIR2DS1陽(yáng)性患者夫婦雙方第2組HLA-C等位基因組合分布與對(duì)照者差異有顯著性(P=0.004). 結(jié)論：1.KIR2DS1基因陽(yáng)性率的增高以及活化性KIR基因數(shù)目增多可能是不明原因早期復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)的發(fā)病原因之一。2.夫婦雙方第2組HLA-C等位基因減少可

6、能與不明原因早期復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)的發(fā)病有關(guān)。3.KIR2DS1基因陽(yáng)性夫婦缺乏第2組HLA-C等位基因可能增加早期復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)的發(fā)病機(jī)率。 目的：探討不明原因的早期復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)患者殺傷細(xì)胞免疫球蛋白樣受體(KIR)基因型分布特點(diǎn)。 方法：采用序列特異性引物聚合酶鏈反應(yīng)(PCR/SSP)法，分析在我院就診的95例不明原因復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)(RSA)患者和111例無血緣關(guān)系的正常婦女KIR基因型。 結(jié)果：RSA病例組2

7、DL1+，2DL2+，2DL3+，2DL4+，2DL5+，3DL1+，3DL2+，3DL3+，2DS1+，2DS2+，2DS3-，2DS4+，2DS5+，3DS1+，KIR2DP1+基因型陽(yáng)性率最高，占14.74％，正常對(duì)照組2DL1+，2DL2-，2DL3+，2DL4+，2DL5-，3DL1+，3DL2+，3DL3+，2DS1-，2DS2-，2DS3-，2DS4+，2DS5-，3DS1-，KIR2DP1+基因型陽(yáng)性率最高，占20.72

8、％，且RSA病例組2DL1+,2DL2+，2DL3+，2DL4+，2DL5+，3DL1+，3DL2+，3DL3+，2DS1+，2DS2+，2DS3+，2DS4+，2DS5+，3DS1+，KIR2DP1+基因型陽(yáng)性率較正常對(duì)照組顯著升高(P=0.007)。 結(jié)論：RSA患者中有新的KIR基因型存在，RSA患者與正常對(duì)照者KIR基因型分布差異可能是RSA發(fā)病的原因之一。 目的：探討轉(zhuǎn)錄水平殺傷細(xì)胞免疫球蛋白樣受體(KIR)在

9、不明原因早期復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)(RSA)患者和正常對(duì)照者早孕子宮蛻膜組織中表達(dá)的差異。 方法：選擇2006年1月至2007年6月我院就診的RSA患者和同期我院計(jì)劃生育門診因計(jì)劃外妊娠行人工流產(chǎn)術(shù)者各30例，并根據(jù)孕周分組，應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)法檢測(cè)KIR2DL1、2DL2、2DL3、2DL4、3DL1、3DL2 mRNA在RSA患者和對(duì)照者早孕子宮蛻膜組織中的表達(dá)，應(yīng)用SYBR Green I熒光實(shí)時(shí)定量PCR法

10、檢測(cè)KIR2DL1、2DL3mRNA在子宮蛻膜組織中的相對(duì)表達(dá)量，比較RSA患者和對(duì)照者早孕子宮蛻膜組織抑制性KIRmRNA表達(dá)的差異。 結(jié)果：1.蛻膜組織中檢出KIR2DL1、2DL2、2DL3、2DL4、3DL1、3DL2基因表達(dá)，其中RSA患者KIR2DL2表達(dá)率較正常對(duì)照組降低，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2.RSA患者KIR2DL1、2DL3相對(duì)表達(dá)量較正常對(duì)照者降低，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3.不同孕周的患者KIR2DL1、2D

11、L3相對(duì)表達(dá)量較同期正常對(duì)照組降低，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論：早孕蛻膜組織KIR2DL1、2DL2、2DL3、2DL4、3DL1、3DL2mRNA的表達(dá)變化與不明原因早期復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)無直接關(guān)系。 目的：探討不明原因早期復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)(RSA)患者和正常對(duì)照者早孕子宮蛻膜組織中殺傷細(xì)胞免疫球蛋白樣受體CD158表達(dá)的特征。 方法：選擇2006年1月至2007年6月我院就診的RSA患者和同期我院計(jì)劃生育門診因計(jì)劃

12、外妊娠行人工流產(chǎn)術(shù)者各30例，并根據(jù)孕周分組，應(yīng)用免疫熒光染色法和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)早孕蛻膜組織細(xì)胞表面標(biāo)記，比較RSA患者和對(duì)照者CD56、CD16、CD158a(KIR2DL1)、CD158b(KIR2DL2/3)表達(dá)的變化規(guī)律。 結(jié)果：1.早孕子宮蛻膜組織小動(dòng)脈和腺體周圍可見大量CD56+細(xì)胞分布。2.RSA患者CD56+細(xì)胞數(shù)顯著少于對(duì)照者(P=0.007)，≤7孕周患者CD56+細(xì)胞數(shù)與同孕期對(duì)照者有極顯著差異(P=0.0

13、04)，隨著孕周的增加差異減小。RSA患者CD56+CD16-細(xì)胞較對(duì)照者降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)3.RSA患者蛻膜單個(gè)核細(xì)胞CD158a在早孕各時(shí)期表達(dá)量均顯著下降(P＜0.05)，而CD158b在≤孕10周患者中表達(dá)量顯著下降(P＜0.05)，孕10周以上患者和對(duì)照者表達(dá)量無顯著差異。4.RSA患者CD56+CD16-細(xì)胞表面CD158a表達(dá)量顯著降低(P=0.026)，按孕周分組分析顯示孕7周-10周患者CD56+C

14、D16-細(xì)胞表面表達(dá)CD158a較同期對(duì)照者顯著降低(P=0.010)。5.正常早孕蛻膜組織CD158a、CD158b與CD56表達(dá)呈顯著正相關(guān)。 結(jié)論：1.CD56+CD16-細(xì)胞為蛻膜單個(gè)核細(xì)胞的優(yōu)勢(shì)細(xì)胞群，早孕蛻膜組織CD56+CD16-細(xì)胞減少可能為不明原因自然流產(chǎn)的發(fā)病機(jī)制之一。2。CD56+CD16-細(xì)胞表面CD158a表達(dá)下降可能與不明原因自然流產(chǎn)有關(guān)。3.正常早孕蛻膜單個(gè)核細(xì)胞CD158a、CD158b與CD56