三峽庫區(qū)煙曲霉IMB-SX28次級代謝產物的分離及活性初步研究.pdf

1、背景：許多天然產物都是來源于已知微生物的次級代謝產物。許多低分子量的代謝產物具有顯著生理活性。如青霉素、頭孢菌素、麥角新堿還有他汀類等都是真菌類次級代謝產物。三峽庫區(qū)(Three Gorges Reservoir)位于由青藏高原向長江中下游平原傾斜的過渡帶，是我國生態(tài)環(huán)境保護的重點地區(qū)。對三峽庫區(qū)的土壤真菌研究現(xiàn)在還很少，只有關于三峽庫區(qū)大型真菌的研究。因此對三峽庫區(qū)這一獨特的地理位置的土壤真菌研究可以豐富其菌種資源，為以后的開發(fā)與利用

2、提供一些參考資料。本文對從三峽庫區(qū)采集的土壤樣品中分得一株抑菌活性強的土壤真菌進行研究。煙曲霉是一種重要的致病真菌，其某些成分或毒素可直接造成機體損害，其次生代謝產物也是生物活性產物或者新藥開發(fā)的重要來源。以往從其代謝產物中分離得到的多個化合物，有些毒性較大或藥理活性一般，或產物量甚微，很難開發(fā)成藥物而應用于臨床。近年來發(fā)現(xiàn)其中一些化合物具有新的藥理活性和骨架結構因而重新引起人們的關注。
　　 目的：由于以往不同生源的煙曲霉(A

3、spergillus fumigatus)次級代謝產物研究所表現(xiàn)出來的化學和活性多樣性，有必要進行更多的發(fā)酵條件和生物合成代謝調控研究，以期獲得更多的結構新穎、活性特殊的次級代謝產物。因此對不同發(fā)酵培養(yǎng)基條件下煙曲霉的次級代謝產物活性研究就很有意義。
　　 方法：通過研究該菌在5種不同培養(yǎng)基中發(fā)酵情況，考察煙曲霉在不同培養(yǎng)基條件下次級代謝產物的產生情況。選用的培養(yǎng)基為PD液體培養(yǎng)基，GC培養(yǎng)基，查氏培養(yǎng)基，查氏加1％玉米漿培養(yǎng)基

4、，查氏加1％黃豆餅粉培養(yǎng)基。在選定的發(fā)酵條件下進行50L大規(guī)模發(fā)酵，得到相應的一些活性物質。用丙酮提取菌體，得到胞內代謝產物。然后進行減壓濃縮處理得到次級代謝產物浸膏，再采用柱層析、Sephadex LH-20和制備HPLC等方法進行分離純化，得到相應的單體化合物，并用NMR、MS方法分析化合物結構。所得到的化合物進行生物活性實驗，包括抗菌與MTT法抗腫瘤實驗。
　　 結果：利用真菌基因組的ITS保守序列進行菌種鑒定，PCR擴增

5、測序后在NCBI中進行比對，鑒定為煙曲霉，命名為IMB-SX28。該菌在查氏加％1玉米漿作為培養(yǎng)基條件下，胞內次級代謝產物的抗菌活性最強，且HPLC色譜峰面積最大。通過50L大規(guī)模發(fā)酵罐處理得到150g的菌體丙酮提取浸膏部分。經過柱層析等分離方法得到一組(共15種)不同的分離組分。其中分離了3個不同的化合物單體，分別是SX-11為鄰苯二甲酸二丁酯、SX-26為硬脂酸、SX-60為氮雜環(huán)化合物。其中SX-60具有較強抗金葡菌活性其抑菌圈直