紅樹植物內(nèi)生真菌生物活性及菌株A-1-2-3次級代謝產(chǎn)物的初步研究.pdf

1、近年來，隨著研究熱點的轉(zhuǎn)移，新藥的研究開發(fā)已突破了陸生資源的束縛，拓展到了生態(tài)和物種遠比陸地生境復雜多樣的海洋。紅樹植物生長于海岸潮間帶，其獨特的生存環(huán)境賦予它豐富的微生物資源，是當前倍受重視的藥用新資源。 本文對福建省九龍江口浮宮鎮(zhèn)草埔頭紅樹林區(qū)木欖(Bruguieragymnorrhiza)和秋茄(Kandeliacandel)2種紅樹植物的內(nèi)生真菌資源進行為期1年的種群動態(tài)調(diào)查并對這些菌株的抗菌、抗腫瘤、乙酰膽堿酯酶及胰蛋

2、白酶抑制劑活性進行了初步研究。對活性菌株A-1-2-3的代謝產(chǎn)物進行分離純化并對分離得到的化合物進行結(jié)構(gòu)鑒定和生理活性研究，為深入開發(fā)和保護紅樹植物內(nèi)生真菌藥用資源提供理論依據(jù)，并期望得到有開發(fā)前景的候選藥物先導化合物。 從2種紅樹植物的樹葉、樹皮和樹根樣品中分離到290株內(nèi)生真菌。對其種群動態(tài)進行初步考察，結(jié)果顯示，木欖和秋茄內(nèi)生真菌數(shù)量高峰期分別為4月份和10～12月份；青霉(Penicillium)、交鏈孢(Alterna

3、ria)、Diaporthe和無孢目(thenonsporulatinggroups)是秋茄中的主要優(yōu)勢屬；木欖內(nèi)生真菌主要優(yōu)勢屬為頭孢霉(Cephalosporium)、交鏈孢、青霉等。不同宿主對內(nèi)生真菌的季節(jié)分布有重要的影響。以枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)、大腸桿菌(Escherichiacoli)、金黃色葡萄球菌(Staphlococcusaureus)、白色假絲酵母(Candidaalbicans)、黑曲霉(

4、Aspergillusniger)為指示菌，采用瓊脂擴散法對這些菌株進行抗菌活性檢測，共篩選得到活性菌株40株，占總菌株數(shù)的13.8％；采用MTT法對其體外抗腫瘤活性進行檢測，發(fā)現(xiàn)17株內(nèi)生真菌對KB(人口腔上皮癌)和/或Raji(人B淋巴瘤)細胞具有抑制作用，占總菌株數(shù)的5.9％。生物活性菌株分布于青霉、交鏈孢、擬青霉、無孢目等10個不同的分類單元中，2種宿主植物內(nèi)生真菌抗菌及抗腫瘤活性均有不同程度的季節(jié)差異性。 菌株A-1-

5、2-3分離自秋茄植物的葉子，經(jīng)分子鑒定為一株擬莖點霉(Phomopsissp.)。本文采用固體培養(yǎng)、有機溶劑提取、分相萃取、柱層析、和重結(jié)晶等分離純化方法從其發(fā)酵產(chǎn)物中分離到9個純的化合物(Y6，A4，A3，Y29，Y10，A5，Y9，A1和SRS39)，并采用核磁共振(NMR)波譜解析結(jié)合電噴霧質(zhì)譜(ESI-MS)的方法鑒定其結(jié)構(gòu)，經(jīng)數(shù)據(jù)庫搜索，發(fā)現(xiàn)有5個結(jié)構(gòu)(A3，Y29，Y10，Y9和SRS39)未見文獻報道，為新化合物。發(fā)現(xiàn)上述

6、9個化合物都屬于聚酮類化合物，包括真菌環(huán)氧二烯類化合物(Y10，A5)、松胞菌素類化合物(Y9，A1)、異苯并呋喃酮類化合物(Y6，A4，A3，Y29)以及大環(huán)內(nèi)酯(SRS39)4種類型。采用單晶衍射X-ray的解析的方法對其中1個新結(jié)晶化合物Y10進行晶體結(jié)構(gòu)研究，確定該化合物為去乙酰基環(huán)氧二烯(Deacetylmycoepoxydiene)，未見文獻報道其晶體結(jié)構(gòu)。 對上述化合物中的7個量較多的化合物進行抗菌、抗腫瘤、乙酰膽

7、堿酯酶及胰蛋白酶抑制劑活性檢測。結(jié)果表明，7個化合物對Raji細胞都具有不同程度的抑制作用，其中化合物Y10，A5，Y9和A1具有很強的抑制活性，IC50分別為3.0μg/mL、5.6μg/mL、2.5μg/mL和250ng/mL，而沒有檢測到其他活性，這個結(jié)果也與出發(fā)菌株A-1-2-3初篩結(jié)果相吻合，是否具有其它生物活性還有待進一步研究。 新化合物Y10(Deacetylmycoepoxydiene)與已知化合物A5(myco

8、epoxydiene)結(jié)構(gòu)骨架新穎，且都具有很強的體外抗腫瘤活性，本文采用流式細胞儀測定其對細胞周期的影響，結(jié)合單細胞凝膠電泳和DNA片斷化“DNAladder”檢測方法初步研究其作用機理。結(jié)果表明，Deacetylmycoepoxydiene和mycoepoxydiene可能不是通過誘導細胞凋亡機制作用于腫瘤細胞的，其確切機制還有待進一步研究。 本文結(jié)果表明，紅樹植物內(nèi)生真菌中蘊藏著較豐富的抗菌和抗腫瘤活性物質(zhì)產(chǎn)生菌，同時也蘊