AE1在胃和結腸腺癌組織中的表達及其致癌作用的研究.pdf

1、陰離子交換蛋白1（anion exchanger，AE1）又名帶3蛋白，是存在于紅細胞膜上的主要內在性糖蛋白質，介導Cl-和HCO3-跨膜交換過程，調節(jié)細胞內的pH值。我們在對AE1C端域結構與功能進行研究的過程中發(fā)現并報道了AE1與關鍵的腫瘤抑制蛋白（p16）直接相互作用。這是國內外關于膜蛋白質與p16結構與功能相關的首次報道。 P16通過與CDK4/CDK6直接相互作用負調節(jié)細胞周期。由于在大量的臨床腫瘤病例中發(fā)現了高頻率的

2、p16缺失和突變，使之與p53一樣成為眾多腫瘤相關蛋白中重要的研究目標。十余年來基礎和臨床研究發(fā)現p16除調節(jié)細胞周期外，還有其他多重生物學功能，但是，這些研究主要將目光集中在p16調節(jié)的對象而忽略了（或沒有突破）p16本身受哪些因素的調控。P16與AE1相互作用的發(fā)現，為AE1及p16功能的調控提供了新的研究線索。 為深入研究AE1和p16相關的生理和病理學意義，我們對6種腫瘤細胞系AE1、AE2和p16的表達進行了檢測，We

3、stern blotting結果顯示所有腫瘤細胞都與正常組織一樣表達AE家族成員AE2，但AE1異常表達在胃腺癌和結腸腺癌細胞（正常組織不表達AE1），采用免疫細胞化學及膜漿分離的方法對兩種腫瘤細胞AE1和AE2進行定位發(fā)現AE2主要定位于細胞膜，而AE1主要分布在細胞漿。通過核漿分離對p16在細胞內的表達進行檢測，結果顯示該蛋白也異常分布在胃腺癌和結腸腺癌細胞漿，這一結果提示p16的胞漿分布可能與AE1的異常表達相關，Co-IP證明了

4、內源性AE1和p16在兩種腫瘤細胞內相互作用。由于AE1和AE2是調節(jié)細胞pH值的重要蛋白質，AE1的異常表達可能影響細胞pH的正常調節(jié)，因此，我們采用離子成像分析系統(tǒng)對單個腫瘤細胞的pH進行檢測，結果發(fā)現胃腺癌和結腸腺癌比其他腫瘤細胞偏堿性。為排除p16在細胞漿內的分布源于細胞內pH的改變的可能性，本研究將胃腺癌和結腸腺癌細胞培養(yǎng)在酸性環(huán)境（pH6.0）中12-72小時，結果證明胃腺癌細胞p16的表達水平在酸性環(huán)境培養(yǎng)下36-48小時

5、升高、72小時下降。結腸腺癌細胞p16的表達水平不變化。P16在兩種腫瘤細胞漿內的定位未受酸性pH的影響。上述結果說明p16在兩種腫瘤細胞漿內分布是通過與AE1直接相互作用而被扣押。在胃腺癌和結腸腺癌細胞過表達AE1扣押了更多的p16，而采用RNAi技術將AE1 knockdown，使p16釋放并重新定位于細胞核。穩(wěn)定knockdown AE1的腫瘤單克隆細胞出現生長抑制和死亡。通過本研究我們提出腫瘤發(fā)生相關的p16功能失調的新機制。