桔苷靈糖漿及其原料藥的質(zhì)量控制與藥效學(xué)的研究.pdf

1、桔苷靈糖漿是本研究室以桔梗等中藥有效組分為主要原料研發(fā)的現(xiàn)代中藥新制劑，迄今為止，尚未見有相關(guān)報(bào)道。本研究以桔梗有效組分為質(zhì)量控制指標(biāo)，采用高效液相色譜與蒸發(fā)光散射檢測(cè)器聯(lián)用的方法與技術(shù)，對(duì)桔苷靈糖漿及其原料藥進(jìn)行了定性、定量研究，為本制劑及其原料藥進(jìn)一步的研發(fā)與應(yīng)用建立了質(zhì)量控制的方法與技術(shù)。同時(shí)對(duì)桔苷靈糖漿進(jìn)行了鎮(zhèn)咳、祛痰的研究，為桔苷靈糖漿新中藥的開發(fā)及臨床應(yīng)用奠定了藥效學(xué)的基礎(chǔ)。 桔苷靈糖漿：1.指紋圖譜定性方法與技術(shù)樣

2、品前處理：桔苷靈糖漿2mL，D101大孔吸附樹脂柱(柱床：280mm×14mm)，沈脫溶劑為水．乙醇系統(tǒng)，收集50％乙醇流分，濃縮至干，以甲醇定溶至5mL，即得樣品液。色譜條件：Hanban LichrospherC18色譜柱(4.6mm x250mm，5μm)，柱溫為35℃；檢測(cè)器為ELSD，漂移管溫度為90℃，霧化溫度為50℃，載氣流速為1.4SLM，壓力為0.40MPa；流動(dòng)相水一乙腈，梯度洗脫，流速為1.0mL/min。在本色譜

3、條件下，對(duì)10批次的桔苷靈糖漿樣品進(jìn)行了測(cè)定。結(jié)果：①樣品各峰基本達(dá)到基線分離；②以桔梗皂苷D作為參照峰，歸納了9個(gè)共有峰，標(biāo)準(zhǔn)譜各峰相對(duì)保留時(shí)間為：0.0692(1)、0.5983(2)、0.6181(3)、0.744l(4)、0.9739(5)、1.0000(S)、1.0389(7)、1.1668(8)、1.2118(9)；相對(duì)峰面積為：0.1186(1)、0.0424(2)、0.2314(3)、0.1716(4)、0.1691(5

4、)、1.0000(S)、0.2513(7)、0.0381(8)、0.1313(9)，建立了桔苷靈糖漿的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。以相似度為指標(biāo)，采用相關(guān)系數(shù)法和夾角余弦法，對(duì)指紋圖譜進(jìn)行了方法學(xué)考察，其結(jié)果：精密度的相似度≥0.9994、穩(wěn)定性的相似度>0.9993、重復(fù)性的相似度>0.9969。經(jīng)3批樣品驗(yàn)證，其色譜圖與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的相似度均≥0.9399，表明，所建立的指紋圖譜可信度高，可用于桔苷靈糖漿的質(zhì)量控制。2.多指標(biāo)體系的定量方法與技術(shù)

5、樣品前處理方法及其色譜條件同1，以桔梗皂苷D為標(biāo)準(zhǔn)品建立了以8種主要成分為質(zhì)量控制指標(biāo)的含量測(cè)定方法。對(duì)本方法進(jìn)行了方法學(xué)考察，其結(jié)果：線性方程Y=1.4258X-12.449(r=0.9996)，線性范圍為3.96μg～19.8μg，精密度RSD=1.95％，穩(wěn)定性RSD=1.15％，重復(fù)性RSD=2.47％，添加回收率平均為94.00％，RSD=2.36％。桔苷靈糖漿樣品主要有效組分的平均含量為1.3633 mg/mL，RSD=6.

6、47％。本方法靈敏、準(zhǔn)確、重復(fù)性好、回收率高、操作簡(jiǎn)便。原料藥：1.指紋圖譜定性方法與技術(shù)樣品前處理：原料藥10mg，精密稱定，以甲醇定溶至5mL，即得樣品液。色譜條件：同前。在本色譜條件下，對(duì)10批次的原料藥樣品進(jìn)行了測(cè)定。結(jié)果：①樣品各峰基本達(dá)到基線分離；②以桔梗皂苷D作為參照峰，歸納了8個(gè)共有峰，標(biāo)準(zhǔn)譜各峰相對(duì)保留時(shí)間為：0.5988(1)、0.6128(2)、0.7448(3)、0.9732(4)、1.0000(S) 1.039

7、1(6)、1.1701(7)、1.2153(8)；相對(duì)峰面積為：0.1425(1)、0.4004(2)、0.1783(3)、0.1406(4)、0.0000(S)、0.4296(6)、0.0985(7)、0.3361(8)，建立了原料藥的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。以相似_度為指標(biāo)，采用相關(guān)系數(shù)法和夾角余弦法，對(duì)指紋圖譜進(jìn)行了方法學(xué)考察，其結(jié)果：精密度的相似度≥0.9998、穩(wěn)定性的相似度≥0.9987、重復(fù)性的相似度≥0.9640。經(jīng)3批樣品驗(yàn)證，

8、其色譜圖與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的相似度均≥0.9763，表明，所建立的指紋圖譜可信度高，可用于原料藥的質(zhì)量控制。2.多指標(biāo)體系的定量方法與技術(shù)樣品前處理方法及其色譜條件同1，以桔梗皂苷D為標(biāo)準(zhǔn)品建立了以8種主要成分為質(zhì)量控制指標(biāo)的含量測(cè)定方法。對(duì)本方法進(jìn)行了方法學(xué)考察，其結(jié)果：線性方程Y=1.5486X-12.073(r=0.9990)，線性范圍為3.96gg～19.8gg，精密度RSD=1.95％，穩(wěn)定性RSD=2.47％，重復(fù)性RSD=2.

9、44％，添加回收率平均為97.33％，RSD=2.59％。桔苷靈糖漿樣品主要有效組分的平均含量為38.42％，RSD=3.33％。本方法靈敏、準(zhǔn)確、重復(fù)性好、回收率高、操作簡(jiǎn)便，可用于原料藥的質(zhì)量控制。桔梗飲片：樣品前處理：對(duì)提取溶劑、提取溫度、提取次數(shù)和精制方法考察，確定前處理方法：精密稱取桔梗粉末0.5g，石油醚脫脂，甲醇超聲提取4次(提取溫度65℃)，合并提取液，濃縮至干后加5mL水溶解，過濾，濾液行D101大孔吸附樹脂柱(柱床：

10、280mm×14mm)，洗脫溶劑為水．乙醇系統(tǒng)，梯度洗脫，收集50％乙醇流分，濃縮至干，以甲醇定溶至5mL，即得樣品液。色譜條件：同前。以桔梗皂苷D為標(biāo)準(zhǔn)品建立了以8種主要成分為質(zhì)量控制指標(biāo)的含量測(cè)定方法。對(duì)本方法進(jìn)行了方法學(xué)考察，其結(jié)果：線性方程Y=1.2706X-11.947(r=0.9991)，線性范圍為4.1681xg～20.84gg，精密度RSD=0.958％，穩(wěn)定性RSD=1.33％，重復(fù)性RSD=2.98％，添加回收率平均

11、為95.60％，RSD=1.91％。桔苷靈糖漿樣品主要有效組分的平均含量為0.8005％，RSD=2.02％。本方法靈敏、準(zhǔn)確、重復(fù)性好、回收率高、操作簡(jiǎn)便，可用于桔梗飲片的質(zhì)量控制。桔苷靈糖漿藥效學(xué)：采用氨水誘發(fā)小鼠咳嗽法和大鼠毛細(xì)管祛痰法研究桔苷靈糖漿的鎮(zhèn)咳和祛痰作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果：①氨水誘發(fā)小鼠咳嗽法，桔苷靈糖漿高、中、低劑量組潛伏期分別為50.08±12.61s、37.77±7.69s、31.00±5.85s，與正常組比較(26.0

12、8±8.68s)均能使小鼠咳嗽潛伏期延長，其中高、中劑量組差異有極顯著性(P<0.01)，兩者鎮(zhèn)咳率分別達(dá)到92.02％和44.82％，低劑量組無差異，鎮(zhèn)咳率為18.87％；與磷酸可待因組(43.25±11.60s)比較，高劑量組和中劑量組均無差異、低劑量組差異有極顯著性(P<0.01)。②大鼠毛細(xì)管祛痰法，桔苷靈糖漿高、中、低劑量組排痰量分別為：15.80±1.36cm、13.18±1.48cm、11.75±0.46cm，與生理鹽水組