原料藥中雜質(zhì)的控制與案例分析

1、原料藥中雜質(zhì)的控制與案例分析,中國藥品生物制品檢定所胡昌勤,雜質(zhì)質(zhì)控理念的變遷,Impurity Profile （雜質(zhì)譜）: A description of the identified and unidentified impurities present in a drug substance. 對存在于藥品中所有已知雜質(zhì)和未知雜質(zhì)的總的描述。,第一次飛躍,第二次飛躍,,,頭孢泊肟酯有關(guān)物質(zhì)分析的HPLC色譜圖1=頭孢泊肟

2、，2=去甲氧基頭孢泊肟酯異構(gòu)體A，3=頭孢泊肟酯異構(gòu)體A，4=去甲氧基頭孢泊肟酯異構(gòu)體B+△3異構(gòu)體，5=頭孢泊肟酯異構(gòu)體B+反式頭孢泊肟酯A，6=反式頭孢泊肟酯B，7=N-甲酰基頭孢泊肟酯異構(gòu)體A，8=NAC-CPOD-PRX異構(gòu)體A，9=N-甲?；^孢泊肟酯異構(gòu)體B，10=N-乙?；^孢泊肟酯異構(gòu)體B，11=頭孢泊肟酯開環(huán)二聚體A，12=頭孢泊肟酯開環(huán)二聚體B,雜質(zhì)譜控制與雜質(zhì)控制的區(qū)別？,雜質(zhì)譜控制的整體解決方案,原料藥雜質(zhì)控制

3、的相關(guān)法規(guī),Q3A： 新原料藥中的雜質(zhì)Q3B： 新藥制劑中的雜質(zhì)Q3C： 殘留溶劑化學(xué)藥品雜質(zhì)研究的技術(shù)指導(dǎo)原則,對新原料藥中的雜質(zhì)如何進(jìn)行闡述？,化學(xué)方面分類與鑒定報告雜質(zhì)的控制（檢查項(xiàng)目、限度）分析方法安全性方面對安全性研究及臨床研究中存在的潛在雜質(zhì)（在當(dāng)時的實(shí)驗(yàn)樣品中不存在或含量極低的雜質(zhì)）的安全性評估,雜質(zhì)的分類,有機(jī)雜質(zhì)反應(yīng)起始物、副產(chǎn)物、中間體、降解產(chǎn)物、試劑、配位體、催化劑等無機(jī)雜質(zhì)試劑、配位體、

4、催化劑、重金屬、無機(jī)鹽及過濾介質(zhì)、活性炭等殘留溶劑常用的有69種,基本術(shù)語,Qualification(界定)：是獲得和評價與研發(fā)新藥相關(guān)的雜質(zhì)的數(shù)據(jù)的過程，這些數(shù)據(jù)用于建立新藥的安全閾值（水平），單個的或一些已確定的雜質(zhì)的含量在這個閾值下可以確保藥品的生物安全性。Reporting threshold 或 Reporting level (報告閾值或報告水平）：新藥注冊時雜質(zhì)應(yīng)被報告的限度。Identified thresho

5、ld (鑒別閾值）：新藥注冊時雜質(zhì)應(yīng)被鑒別的限度。Qualificated threshold (界定閾值）：新藥注冊時雜質(zhì)應(yīng)被界定的限度。,新藥原料藥的雜質(zhì)限度,,（以原料藥的響應(yīng)因子計）,如何合理的對原料藥中的雜質(zhì)進(jìn)行報告和控制？,研究報告中對有機(jī)雜質(zhì)的基本要求,對新原料藥在合成、精制和儲存過程中最可能產(chǎn)生的那些實(shí)際存在的雜質(zhì)和潛在的雜質(zhì)進(jìn)行綜述。根據(jù)合成工藝中化學(xué)反應(yīng)的原理，結(jié)合反應(yīng)條件等，闡述合成工藝中可能產(chǎn)生的副產(chǎn)物；根

6、據(jù)起始原料的結(jié)構(gòu)及來源，闡述可能由起始原料引入的有關(guān)物質(zhì)；根據(jù)起始原料、中間體、產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，產(chǎn)生合成中可能產(chǎn)生的降解產(chǎn)物；根據(jù)產(chǎn)物及雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，結(jié)合純化精制工藝，闡述去除雜質(zhì)的關(guān)鍵工藝。,頭孢噻肟鈉（Cefotaxime Sodium）雜質(zhì)的控制,以頭孢菌素C為起始物，先經(jīng)化學(xué)或酶催化反應(yīng)生成7-氨基頭孢烯酸（7-ACA），然后進(jìn)行?；磻?yīng)生成頭孢噻肟酸（CTAX），最后生成頭孢噻肟鈉（CTAX-Na）。,頭孢菌素的各種可能

7、的降解反應(yīng)類型,?-內(nèi)酰胺環(huán)的降解 氫化噻嗪環(huán)的雙鍵異構(gòu)（Δ-異構(gòu)）,,,,3. 6、7位氫的反向異構(gòu),,,4. 7位碳相連的側(cè)鏈反應(yīng),,分子結(jié)構(gòu)中7位碳側(cè)鏈上有α-氨基的頭孢菌素，如頭孢氨芐、頭孢羥氨芐、頭孢拉定、頭孢來星、頭孢克羅等藥物，還可發(fā)生分子內(nèi)親核反應(yīng)，生成哌嗪二酮衍生物的降解物,,具有苯苷氨酸側(cè)鏈的?-內(nèi)酰胺抗生素可以降解為2-羥基-3-苯基吡嗪衍生物，這種化合物具有熒光特性，頭孢克洛、氯碳頭孢均會產(chǎn)生這種降

8、解產(chǎn)物。,,5. 發(fā)生在R3取代基的反應(yīng),,當(dāng)3位碳上的取代基為乙酰氧甲基時，易脫去乙?；纬擅撘阴；到馕?。在加熱、酸性等條件下，可進(jìn)一步進(jìn)行分子內(nèi)部環(huán)和，此時生成的主要降解產(chǎn)物為內(nèi)酯。,,6. 雙鍵順反式異構(gòu)（E-異構(gòu)）7. 酯的水解 8. 聚合反應(yīng)9. 其它反應(yīng),頭孢曲松、頭孢噻肟、頭孢它啶、頭孢地尼等有甲氧亞氨鍵的頭孢菌素均會產(chǎn)生E-異構(gòu)體，多數(shù)在光照的情況易發(fā)生此類反應(yīng)。,基于降解反應(yīng)的雜質(zhì)分析,發(fā)生在頭孢菌素

9、R3取代基的降解反應(yīng),,當(dāng)3位碳上的取代基為乙酰氧甲基時，易脫去乙酰基，形成脫乙酰基降解物。在加熱、酸性等條件下，可進(jìn)一步進(jìn)行分子內(nèi)部環(huán)和，此時生成的主要降解產(chǎn)物為內(nèi)酯。 雜質(zhì)B、雜質(zhì)E可以源于頭孢噻肟的降解,雜質(zhì)譜分析,頭孢噻肟有關(guān)物質(zhì)分子結(jié)構(gòu),頭孢噻肟鈉的合成工藝,,由于起始物頭孢菌素C含有DAO-CC、DA-CC和CC-LT等雜質(zhì)，在半合成步驟中發(fā)生相同的反應(yīng)，分別生成DAO-ACA、DA-ACA和ACA-LT，進(jìn)而生成DAO-

10、CTAX、DA-CTAX和CTAX-LT等雜質(zhì)。,雜質(zhì)E可以源于起始原料雜質(zhì)E可以源于合成中的任一中間過程,雜質(zhì)譜分析,頭孢噻肟有關(guān)物質(zhì)典型色譜圖（235nm）,雜質(zhì)譜分析,頭孢噻肟有關(guān)物質(zhì)雜質(zhì)B含量最大，雜質(zhì)C含量最低合成副產(chǎn)物：雜質(zhì)A、雜質(zhì)E和雜質(zhì)G降解雜質(zhì)：雜質(zhì)F,,,生產(chǎn)工藝中產(chǎn)生的雜質(zhì),,闡述清楚產(chǎn)品中可能存在那些雜質(zhì)雜質(zhì)的來源生產(chǎn)工藝中通過何種手段去除或控制這些雜質(zhì)的產(chǎn)生實(shí)際產(chǎn)品中這些的雜質(zhì)水平及變化,加替沙

11、星及其十種雜質(zhì)對照品的色譜圖,加替沙星注射液雜質(zhì)譜分析,色譜條件：以三乙胺磷酸溶液 [三乙胺溶液（1→100），用磷酸調(diào)節(jié)pH值至4.3±0.05]-乙腈（87：13）為流動相，檢測波長為325nm，柱溫為30℃，流速為每分鐘1ml。,色譜柱:SHISEIDO CAPCELL PAK C18,加替沙星及10個已知雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)式,主要雜質(zhì)是雜質(zhì)3和雜質(zhì)8,,生產(chǎn)工藝雜質(zhì),原料的雜質(zhì)譜分析,,,光照穩(wěn)定性評價,比較光照前后各雜質(zhì)含量

12、的變化,按隨機(jī)取19批樣品,UV燈下照射10天,雜質(zhì)2、雜質(zhì)4是與光照穩(wěn)定性密切相關(guān)的雜質(zhì),,,大多數(shù)喹喏酮類抗生素對光不穩(wěn)定，什么是光降解雜質(zhì)？,如何合理的對原料藥中的雜質(zhì)進(jìn)行報告和控制？,依據(jù)合成/降解反應(yīng)機(jī)理，鑒別可能雜質(zhì)！全過程跟蹤雜質(zhì)在合成工藝中的變化！,雜質(zhì)控制方法,直接測定色譜法HPLCTLCHPCEGC間接測定溶液的顏色檢查,雜質(zhì)分析方法的選擇,方法互補(bǔ)原則了解不同方法間的相關(guān)性所有的分析方法必須進(jìn)行

13、驗(yàn)證（validation),藥品質(zhì)控RP-HPLC方法,上市后（仿制）藥品分析方法的有效性分析方法的最優(yōu)化分析方法的耐用性新藥研發(fā)如何確定分離對象,所有的雜質(zhì)在所選擇的RP-HPLC系統(tǒng)中被有效的檢出了嗎？是否有雜質(zhì)吸附到色譜柱上未被洗脫？是否有雜質(zhì)在色譜柱上未被保留？是否所檢測到的色譜峰存在共出峰？,新方法,分析方法的有效性（氨芐西林鈉/舒巴坦鈉）,原方法,中國抗生素雜志，2009，34：734,在對各國藥典方法比較

14、的基礎(chǔ)上確定分析方法,所有的雜質(zhì)在所選擇的RP-HPLC系統(tǒng)中被有效的檢出了嗎？是否有雜質(zhì)吸附到色譜柱上未被洗脫？是否有雜質(zhì)在色譜柱上未被保留？是否所檢測到的色譜峰存在共出峰？,,采用HPCE/HPTLC方法驗(yàn)證RP-HPLC方法的有效性,HPCE分析?-內(nèi)酰胺抗生素雜質(zhì)譜最佳分離模式的選擇,JCPS，2010，19（4）：285–292,頭孢菌素有關(guān)物質(zhì)測定中MEKC是HPLC分析的最有效驗(yàn)證方法,MEKC與HPLC測定頭孢

15、菌素有關(guān)物質(zhì)的互補(bǔ)性分析,MEKC具有較強(qiáng)的雜質(zhì)分離能力，但其檢測限（LOD）較高。借助于加速實(shí)驗(yàn)，將MEKC分離出的雜質(zhì)峰數(shù)目與HPLC分離出的含量大于MEKC LOD的雜質(zhì)峰數(shù)目進(jìn)行比較，當(dāng)兩者基本相對時，可以認(rèn)為HPLC方法具有較滿意的分離能力。,藥物分析雜志，待發(fā)表,HPLC與HPTLC分析慶大霉素的比較,HPTLC中的9號和10號斑點(diǎn)在HPLC中被檢出了嗎？,慶大霉素供試品HPTLC色譜圖及對應(yīng)的UV掃描圖譜1.UK1

16、2.UK2 3.UK3 4.UK4 5.C1a 6.UK5 7.C2a+C2 8.C1,,,藥品質(zhì)控RP-HPLC方法,上市后（仿制）藥品分析方法的有效性分析方法的最優(yōu)化分析方法的耐用性新藥研發(fā)如何確定分離對象,基于實(shí)驗(yàn)設(shè)計理念的HPLC方法優(yōu)化理論,JPBA，2009, 49(5): 1192–1202,洛伐他定和辛伐他定有關(guān)物質(zhì)HPLC分析方法的優(yōu)化,,,,新優(yōu)化出的方法比USP的分離度更好，比EP分離出的雜質(zhì)峰更多，比

17、ChP所用的分離時間更短，并達(dá)到了更好的分離效果,藥品質(zhì)控RP-HPLC方法,上市后（仿制）藥品分析方法的有效性分析方法的最優(yōu)化分析方法的耐用性新藥研發(fā)如何確定分離對象,基于QbD理念的雜質(zhì)控制策略,JPBA，2008, 46(3):431-441,藥物雜質(zhì)的可能來源,阿奇霉素的合成途經(jīng),1.原料：紅霉素 A、紅霉素 B、紅霉素 C、紅霉素D、紅霉素 E、紅霉素 F、阿奇霉素B、阿奇霉素C、阿奇霉素E、阿奇霉素F2.中間

18、體：紅霉素A肟（Z）、6，9-亞胺醚、氮紅霉素A、紅霉素A肟（E）、紅霉素 C肟（E）、9，11-亞胺醚、紅霉素C 6，9-亞胺醚、紅霉素A內(nèi)酰胺 3.副產(chǎn)物：紅霉素-N-氧化物、N-去甲基紅霉素A、N-去甲基阿奇霉素A、氨基阿奇霉素A、N-甲酰基-N去甲基阿奇霉素A、N-去甲基-N-苯磺酰基阿奇霉素、阿奇霉素N-氧化物、3’-去（二甲氨基）- 3’,4’-去氫阿奇霉素、 O-甲苯磺?；t霉

19、素肟、紅霉素Z肟重排物、氮紅霉素11，12-硼酸酯、 N，N-去二甲基N-甲?；⑵婷顾谹、丙基阿奇霉素、3’-N， N-去二甲基氨基-酮基阿奇霉素A、阿奇霉素11，12-硼酸酯4.降解產(chǎn)物：去克拉克定糖阿奇霉素A、去克拉克定糖氮紅霉素、紅霉素8， 9-脫水-6，9-半縮酮、紅霉素6，9：9，12-螺縮酮,阿奇霉素中可能存在的雜質(zhì)：37種,模擬色譜圖,實(shí)際色譜圖,采用有效的方法證明雜質(zhì)不存在，而不是陳述雜質(zhì)不存在！,?-內(nèi)酰

20、胺抗生素聚合物的控制,SephadexG-10凝膠色譜系統(tǒng)典型分離圖,樣品,對照,,Kav=0,高效凝膠色譜系統(tǒng),TSK高效凝膠色譜系統(tǒng)Superdex pipted 高效凝膠色譜系統(tǒng)高效疏水凝膠色譜系統(tǒng),高效疏水凝膠色譜系統(tǒng),TSK Gel G2500 HXL凝膠柱（填充劑為苯乙烯－二乙烯基苯共聚物）300×7.8mm i.d;流動相:含0.26％溴化鋰的N,N-二甲基甲酰胺溶液；流速0.4ml/min;檢測波長為

21、280nm。,?-內(nèi)酰胺抗生素聚合物雜質(zhì)分析,頭孢地嗪鈉,頭孢呋辛酯,TSKgel G2000HHR,頭孢丙烯,TSKgel G2500PWXL,法羅培南,TSKgel G2000HHR,TSKgel G2000SWXL,TSKgel G2000SWXL,Sephadex G10 與TSK柱比較,,62,G10柱結(jié)果與TSK柱結(jié)果的相關(guān)性,,Sephadex G10,TSK,聚合物,其他聚合物,,,,二聚物,,頭孢噻肟鈉聚合物分析,HP

22、LC反相色譜系統(tǒng)控制高分子雜質(zhì),通過對指針性雜質(zhì)的測定，表征藥品中高分子雜質(zhì)總量。,,頭孢泊肟酯有關(guān)物質(zhì)分析的HPLC色譜圖1=頭孢泊肟，2=去甲氧基頭孢泊肟酯異構(gòu)體A，3=頭孢泊肟酯異構(gòu)體A，4=去甲氧基頭孢泊肟酯異構(gòu)體B+△3異構(gòu)體，5=頭孢泊肟酯異構(gòu)體B+反式頭孢泊肟酯A，6=反式頭孢泊肟酯B，7=N-甲酰基頭孢泊肟酯異構(gòu)體A，8=NAC-CPOD-PRX異構(gòu)體A，9=N-甲?；^孢泊肟酯異構(gòu)體B，10=N-乙酰基頭孢泊肟酯異

23、構(gòu)體B，11=頭孢泊肟酯開環(huán)二聚體A，12=頭孢泊肟酯開環(huán)二聚體B,（A）阿莫西林鈉在Superdex Peptide高效凝膠色譜系統(tǒng)中的色譜圖 （B）各色譜峰切換到BP有關(guān)物質(zhì)HPLC分析系統(tǒng)后的色譜圖,中國新藥雜志 ,2008,17(24):23,,在溶液中（阿莫西林鈉易形成聚合物），阿莫西林閉環(huán)二聚體和二酮哌嗪阿莫西林（2－S）的含量與各類阿莫西林聚合物含量之和（主峰后雜質(zhì)總量）呈一定的相關(guān)性,中國藥學(xué)雜志, 2009，44（2

24、3）：1821,,柱切換技術(shù),,,反沖模式(Back flushing mode),柱前富集模式(on-column focusing),鹽酸頭孢替安聚合物分析方法的比較,,,,Sephadex G-10系統(tǒng),TSK-Gel G2000swxl系統(tǒng),,柱切換技術(shù),0.8ml/min,TSK系統(tǒng)0.5ml/min,C18系統(tǒng),,對?-內(nèi)酰胺抗生素中的聚合物重點(diǎn)在于研究，證明所采用的工藝是否可能導(dǎo)致樣品聚合物變化！應(yīng)采用適宜的方法對?-

25、內(nèi)酰胺抗生素中的聚合物進(jìn)行控制，而不要僅局限于Sephadex G10系統(tǒng)！,,樣品中雜質(zhì)含量的報告,批次及批量生產(chǎn)日期生產(chǎn)地點(diǎn)生產(chǎn)工藝產(chǎn)品中單個雜質(zhì)含量及雜質(zhì)總量批次用途使用的分析方法,,報告研制過程中所有批次樣品的檢驗(yàn)結(jié)果；檢驗(yàn)結(jié)果應(yīng)用詳細(xì)記錄，而不是簡單描述為“符合規(guī)定”；分別記錄單個雜質(zhì)（已知雜質(zhì)、未知雜質(zhì)）、總雜質(zhì)的含量；所有的雜質(zhì)應(yīng)編號，如根據(jù)保留時間等小于1.0%的雜質(zhì)，表示為兩位小數(shù)，如0.13%,

26、0.06%大于1.0%的雜質(zhì)，表示為一位少數(shù)，如1.3％,在新藥研發(fā)過程中，采用統(tǒng)一的編號系統(tǒng)，表征雜質(zhì)的變化！,,如果新藥研發(fā)過程中雜質(zhì)分析方法改變，應(yīng)分別給出其驗(yàn)證資料并對不同方法的相關(guān)性進(jìn)行評價。色譜圖的相關(guān)性比較是必須的。,,,利用色譜相關(guān)光譜法追蹤色譜峰不同色譜系統(tǒng)中的位置,,雜質(zhì)數(shù)據(jù)的積累是制定藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的重要依據(jù),國內(nèi)新藥研發(fā)中對有關(guān)物質(zhì)控制的誤區(qū),重指標(biāo)，輕方法方法的有效性與樣品的現(xiàn)狀對雜質(zhì)結(jié)構(gòu)的鑒別重視不夠,

27、如何確定微量雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)？,根據(jù)雜質(zhì)來源，產(chǎn)生條件，結(jié)合母核的質(zhì)譜裂解規(guī)律推斷雜質(zhì)的可能結(jié)構(gòu),頭孢菌素類抗生素質(zhì)譜裂解的一般規(guī)律,青霉素類抗生素質(zhì)譜裂解的一般規(guī)律,,鑒定未知同系物結(jié)構(gòu)的策略－1,對于具有相同母核的化合物： 紫外光譜圖可以得到有關(guān)母核結(jié)構(gòu)的信息； 一級質(zhì)譜得到分子量信息； 二級質(zhì)譜得到碎片峰信息,可以推測出有關(guān)各取代基的情況； 利用色譜保留行為來驗(yàn)證推測結(jié)果是否正確。,ACA，535：89-99,

28、2005,分析化學(xué)，34（1）：95-99，2006,藥學(xué)學(xué)報，41（5）：475-480，2006,鑒定未知降解雜質(zhì)結(jié)構(gòu)的策略－2,對于反應(yīng)機(jī)理已知的降解雜質(zhì)： 根據(jù)反應(yīng)原理設(shè)計加速實(shí)驗(yàn)； 一級質(zhì)譜得到分子量信息； 二級質(zhì)譜得到碎片峰信息, 進(jìn)一步推測降解物的結(jié)構(gòu)； 利用UV特征和色譜保留行為來驗(yàn)證推測結(jié)果是否正確。,確定未知雜質(zhì)的策略－3,推測雜質(zhì)的可能結(jié)構(gòu)反合成推測的可能雜質(zhì)LC/MS通過質(zhì)譜裂解規(guī)律和

29、色譜保留時間確定所推測雜質(zhì)結(jié)構(gòu)的準(zhǔn)確性,微量組分的毒性評價,,毒性快速評價平臺,斑馬魚毒性快速評價平臺，對雜質(zhì)的胚胎毒性、神經(jīng)毒性，心臟毒性等進(jìn)行評價。優(yōu)點(diǎn)：雜質(zhì)用量少無需知道雜質(zhì)結(jié)構(gòu)實(shí)驗(yàn)周期短（3－4天一個周期）,Figure 4. Effects of MMTD and TDA on the zebrafish embryonic development (3-dpf). A-D: The embryos treat

30、ed with MMTD at 10 ?g/ml (A), 100 ?g/ml (B), 300 ?g/ml (C) and at 500 ?g/ml (D). E-H: the embryos treated with TDA at 100 ?g/ml (E,F), 300 ?g/ml (G) and at 500 ?g/ml (H); I,J: normal embryos as controls at a lateral view

31、 (I) and a dorsal view (J). Hemorrhage of brain areas is indicated by white arrow, opaque yolk and YE by red arrow, deficient eyes are by slight-blue arrows, colorless and cord-like hearts and enlarged pericardial sacs b

32、y yellow arrows, ripple-like notochords by orange arrows.,雌二醇對斑馬魚胚胎的心臟毒性,斑馬魚作為藥物耳毒性檢測模型,斑馬魚側(cè)線神經(jīng)丘毛細(xì)胞:,(A) 5－dpf 幼體頭部側(cè)面，示 眼窩上 (SO1 and SO2), 耳囊(O1) 和枕部的 (OC1)的神經(jīng)丘；(B) O1神經(jīng)丘毛細(xì)胞雙染色－FM 1-43(紅) 和 Yo-Pro-1 (綠). (C) FM 1-43染色； (

33、D). Yo-Pro-1 染色。 Scale bar = 50 um (A); 10 um (B–D).,Hearing Research 213 (2006) 25–33,,藥物耳毒性檢測利用一種特殊染料對斑馬魚幼體頭部耳蝸區(qū)神經(jīng)丘毛細(xì)胞的染色，檢測毛細(xì)胞的存活狀態(tài)，來判斷檢測物的耳毒性。下圖中紅色圈示耳蝸區(qū)域；給藥組中紅色箭頭示給藥后毛細(xì)胞減少，黃色圈示給藥后1神經(jīng)丘消失。,給藥后,,,系統(tǒng)對照組（正常幼體）,,雜質(zhì)安全性的界定

34、（評估）,,申報者應(yīng)對所制定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的雜質(zhì)限度提供安全性方面的理由。對于一個通過充分的安全性研究和臨床研究的新原料藥，其中任何一個雜質(zhì)的水平被認(rèn)為是已經(jīng)經(jīng)過評價的；對于與動物和/或人體內(nèi)的重要代謝物結(jié)構(gòu)相同的雜質(zhì)，被認(rèn)為是經(jīng)過評價的；雜質(zhì)的實(shí)際含量如果低于雜質(zhì)的界定閾值，也被認(rèn)為是合理的。,對結(jié)構(gòu)已知但含量大于界定限的雜質(zhì)；結(jié)構(gòu)未知且含量大于鑒別限的雜質(zhì)，如對雜質(zhì)的安全性不確定，均需要對雜質(zhì)進(jìn)行界定。,,,頭孢西酮鈉雜質(zhì)限

35、度的評估,頭孢西酮鈉雜質(zhì)限度定為“MMTD不得過1.0%，其它最大雜質(zhì)不得過2.0%，雜質(zhì)總量不得過4.0％”。,如何對雜質(zhì)限度進(jìn)行評估？,頭孢西酮的主要降解雜質(zhì)？頭孢西酮的主要毒性功能基團(tuán)？頭孢西酮的主要毒性雜質(zhì)？,頭孢西酮鈉毒性功能基團(tuán)分析,MMTD結(jié)構(gòu)是頭孢西酮的主要毒性功能基團(tuán),頭孢西酮鈉的毒性反應(yīng)與頭孢唑林鈉相當(dāng),其在斑馬魚胚胎發(fā)育中表現(xiàn)出的畸形與母環(huán)7-ACA及三位側(cè)鏈結(jié)構(gòu)無關(guān)，與MMTD的結(jié)構(gòu)關(guān)系較大。其畸形表型提示，

36、相關(guān)化合物可能主要干擾了胚胎的外胚層（神經(jīng)系統(tǒng)和表皮色素）組織器官和中胚層的心腦血管系統(tǒng)的發(fā)育。,頭孢西酮鈉降解溶液的HPLC色譜圖,,①頭孢西酮的氧化產(chǎn)物主要有兩個氧化降解雜質(zhì)，其RRT分別為0.572和0.672，含量以頭孢西酮計分別為1.75％、6.27％；與降解前樣品比較，頭孢西酮含量約為降解前的80％。②頭孢西酮的酸降解產(chǎn)物主要有一個工藝&降解雜質(zhì)和一個降解雜質(zhì)，其RRT分別為0.253和0.326，含量以頭孢西酮計

37、分別為0.29％、0.42％；與降解前樣品比較，頭孢西酮含量約為降解前的90％。③頭孢西酮的堿降解產(chǎn)物較多，主要有1個工藝&降解雜質(zhì)和4個降解雜質(zhì)，它們的RRT分別為0.186、0.244(?頭孢西酮酸)、0.725(MMTD)、0.913、1.172，含量以頭孢西酮計分別為0.86％、9.27％、4.15％、1.01％、10.07％；與降解前樣品比較，頭孢西酮含量約為降解前的70％。,MMTD是主要毒性雜質(zhì),,頭孢西酮鈉雜質(zhì)

38、限度的評估,頭孢西酮鈉的毒性反應(yīng)與頭孢唑林鈉相當(dāng),其在斑馬魚胚胎發(fā)育中表現(xiàn)出的畸形與母環(huán)7-ACA及三位側(cè)鏈結(jié)構(gòu)無關(guān)，與MMTD的結(jié)構(gòu)關(guān)系較大。其畸形表型提示，相關(guān)化合物可能主要干擾了胚胎的外胚層（神經(jīng)系統(tǒng)和表皮色素）組織器官和中胚層的心腦血管系統(tǒng)的發(fā)育。 MMTD是頭孢西酮鈉的主要降解毒性雜質(zhì)，其致畸毒性較頭孢西酮大10－20倍，如將其含量控制在1％以下，毒性作用基本可以忽略。BP中，頭孢唑林鈉的雜質(zhì)E就是MMTD，其限量也是1％。