三角葉黃連內(nèi)生真菌1621菌株的鑒定及其代謝產(chǎn)物研究.pdf

1、植物內(nèi)生菌普遍存在于各種植物中，許多內(nèi)生菌能產(chǎn)生與宿主植物相同或相似的代謝產(chǎn)物，且許多是未發(fā)現(xiàn)過(guò)的新物質(zhì)。因此利用內(nèi)生菌篩選生物活性成分或先導(dǎo)化合物成為尋找天然藥物的又一條重要途徑，也是植物內(nèi)生菌目前研究的熱點(diǎn)。在課題組前期對(duì)雅連內(nèi)生真菌進(jìn)行了分離和抑菌活性部位篩選的基礎(chǔ)上，本文選取了其中一株具有較強(qiáng)抑菌活性的內(nèi)生真菌1621菌株進(jìn)行鑒定和發(fā)酵產(chǎn)物的研究。
　　采用形態(tài)學(xué)鑒定和分子生物學(xué)鑒定相結(jié)合的手段，確認(rèn)菌株1621為曲霉屬煙

2、曲霉的一個(gè)新菌株，命名CD1621。通過(guò)對(duì)菌株CD1621的發(fā)酵條件的研究，繪制了其生長(zhǎng)益線和發(fā)酵液pH值變化曲線，確定了菌株CD1621生長(zhǎng)所需的最佳C/N比為15∶1;通過(guò)對(duì)碳源、氮源、初始pH值的正交實(shí)驗(yàn)篩選，明確影響的大小依次為:碳源＞氮源＞初始pH值;篩選出的最佳培養(yǎng)基組成為:可溶性淀粉(3％)，硫酸銨(0.2％)，初始pH值為6。
　　采用大孔樹(shù)脂、硅膠柱層析和制各液相等分離純化技術(shù)對(duì)菌株CD1621發(fā)酵液的乙酸乙酯萃

3、取部位分離純化，得到6個(gè)單體化合物，通過(guò)核磁、質(zhì)譜和紅外等波譜學(xué)方法進(jìn)行分析鑒定，確定6個(gè)化合物分別為苯甲酸(Ⅰ)、軟脂酸(Ⅱ)、Monomethylsulochrin(Ⅲ)、PseurotinA(Ⅳ)和2-methy1-5-methoxy-6-hydroxy-2,3-epoxide-p-benzoquinone(Ⅴ)、5-甲基-3-甲氧基-2-羥基-2-環(huán)戊烯-1，4-二酮(Ⅵ)。其中化合物Ⅵ為新化合物，首次從自然界中分離得到;還對(duì)化

4、合物V的核磁、紅外和旋光數(shù)據(jù)進(jìn)行了最新測(cè)定，完善了化合物Ⅴ的結(jié)構(gòu)信息。
　　以大腸桿菌和金黃色葡萄球?yàn)橹甘揪?，采用平板濾紙法對(duì)所分離化合物進(jìn)行抑菌活性檢測(cè)，結(jié)果表明苯甲酸、Monomethylsulochrin和化合物Ⅵ對(duì)大腸桿菌和金黃色葡萄球菌均有一定的抑制作用，PseurotinA對(duì)大腸桿菌有一定的抑制作用，化合物Ⅴ對(duì)金黃色葡萄球菌具有較強(qiáng)的抑制作用。
　　綜上所述，從形態(tài)學(xué)鑒定和分子生物學(xué)兩方面，完成了對(duì)雅連內(nèi)生真菌菌