高滲對小鼠內髓集合管細胞中尿素轉運蛋白A2和水通道蛋白2表達的影響.pdf

1、目的：尿素轉運蛋白A2(ureatransporterA2,UT-A2)和水通道蛋2(aquaporin2,AQP2)在哺乳動物腎臟組織表達,參與尿液濃縮。本實驗研究,高滲是否調節(jié)UTA2和AQP2在小鼠內髓集合管(mouseinnermedullarycollectingduct,mIMCD3)細胞中的表達。
　　方法：分別用UTA2-GFP-pCMV6和AQP2-GFP-pCMV6質粒穩(wěn)定轉染mIMCD3細胞,建立UTA2-m

2、IMCD3和AQP2-mIMCD3穩(wěn)轉細胞系。分別用單純氯化鈉(sodiumchloride,NaCl)、單純尿素、NaCl聯(lián)合尿素的高滲培養(yǎng)基刺激穩(wěn)轉和未穩(wěn)轉的mIMCD3細胞。采用免疫熒光和免疫印記鑒定UTA2和AQP2在穩(wěn)轉細胞系中的表達,采用熒光實時逆轉錄PCR(fluorescence-basedreal-timereversetranscription-PCR,RT-PCR)檢測UTA2和AQP2在mIMCD3細胞中的mRN

3、A表達水平,用免疫印跡檢測UTA2和AQP2在mIMCD3細胞的蛋白表達水平。
　　結果：單純NaCl、單純尿素、NaCl聯(lián)合尿素高滲刺激上調AQP2-mIMCD3細胞中AQP2的mRNA和蛋白表達水平,單純NaCl、NaCl聯(lián)合尿素高滲刺激同樣上調UTA2-mIMCD3細胞中UTA2的mRNA和蛋白表達水平,并且滲透壓越高,AQP2和UTA2表達越多。但是單純尿素刺激對UTA2-mIMCD3細胞中UTA2的表達無明顯影響。NaC