利用農(nóng)桿菌dps基因建立共表達(dá)系統(tǒng)在大腸桿菌中生產(chǎn)輔酶Q-,10-.pdf

1、輔酶Q<,10>(又名泛醌，ubiquinone)主要存在于動物、植物、微生物等細(xì)胞體內(nèi)與線粒體內(nèi)膜相結(jié)合，是生物體呼吸鏈中重要的遞氫體。同時，輔酶Q<,10>也是一種良好的抗氧化劑，在化妝品、醫(yī)藥、保健等方面有重要作用。本研究中，我們從根癌農(nóng)桿菌中克隆了十聚異戊二烯二磷酸合成酶基因(dps)，并在大腸桿菌中成功表達(dá)，并且輔酶Q<,10>的含量比大腸桿菌本身的輔酶Q<,8>含量高。為了建立更好的表達(dá)體系，我們克隆了大腸桿菌輔酶Q<,10

2、>途經(jīng)中的ubiA，ubiC, ubiG基因，建立共表達(dá)體系。結(jié)果表明，共表達(dá)dps和ubiCA基因比只表達(dá)dps基因更有效，輔酶Q<,10>含量提高了5倍。證明ubiA基因為大腸桿菌輔酶合成途經(jīng)中的限速酶。為了大規(guī)模生產(chǎn)輔酶Q<,10>我們對大腸桿菌進(jìn)行了高密度發(fā)酵研究。葡萄糖為底物IPTG誘導(dǎo)流加發(fā)酵32.5 h時，細(xì)胞干重和輔酶Q<,10>含量分別為：85.4 g(DCW)/L和50.29 mg/L，甘油為底物乳糖誘導(dǎo)流加發(fā)酵27