蟲草液體發(fā)酵及提高腺苷含量的研究.pdf

1、本實驗通過篩選比較5株冬蟲夏草菌種，獲得液體發(fā)酵生產(chǎn)冬蟲夏草腺苷的較佳菌株WX-CS。 研究了冬蟲夏草WX-CS的搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件。分別以蠶蛹粉水解液和花生粉作為發(fā)酵培養(yǎng)基不同氮源進(jìn)行正交實驗，確定出影響腺苷含量的主要因素，進(jìn)一步通過響應(yīng)面分析實驗對蠶蛹粉水解液培養(yǎng)基進(jìn)行優(yōu)化，最后通過SAS軟件進(jìn)行嶺脊分析。得到兩種培養(yǎng)基：培養(yǎng)基A為葡萄糖2.0％，花生粉1.5％，麥芽糖1.0％，蠶蛹粉1.0％；培養(yǎng)基B為葡萄糖1.5％

2、，麥芽糖0.8％，蠶蛹粉0.51％，蠶蛹粉水解液2.5％。培養(yǎng)基A發(fā)酵菌絲體腺苷含量低，但菌體干重大；培養(yǎng)基B發(fā)酵菌絲體腺苷含量高，菌體干重小。最佳培養(yǎng)條件為：起始pH6.0，培養(yǎng)溫度22℃，搖瓶轉(zhuǎn)速為150r/min，最佳培養(yǎng)時間84h。在上述條件下，培養(yǎng)基A和培養(yǎng)基B發(fā)酵菌絲體腺苷含量分別為1.507mg/g和3.001mg/g，菌體干重分別為40.26g/L和22.16g/L。 以培養(yǎng)基A進(jìn)行了30L發(fā)酵罐放大實驗，發(fā)酵罐

3、培養(yǎng)條件：接種量10％，轉(zhuǎn)速150-200r/min，通風(fēng)0.5-0.8vvm，溫度22℃，裝液量20L，罐壓0.05MPa。在此條件下發(fā)酵60h，核苷類物質(zhì)紫外OD值0.959，腺苷含量為1.851mg/g，菌體干重達(dá)到39.89g/L。 在培養(yǎng)基B基礎(chǔ)上，研究了不同預(yù)處理方法對腺苷含量測定的影響。采用熱水浴浸提法時，最佳的工藝條件為：浸提溶劑為75％甲醇，料液比1∶5.5，浸提溫度50℃，浸提時間90min。在上述條件下，測

4、得腺苷含量可達(dá)3.683mg/g。 采用高壓液相色譜法測定了冬蟲夏草WX-CS胞內(nèi)核苷類物質(zhì)含量，培養(yǎng)基A發(fā)酵菌絲體腺苷含量為1.851mg/g、尿苷含量為3.263mg/g、鳥苷含量為2.322mg/g；培養(yǎng)基B發(fā)酵菌絲體腺苷含量為4.092mg/g；腺苷含量分別是藥典規(guī)定的18.50倍和40.92倍。 最后測定了冬蟲夏草WX-CS菌絲體中的其他有效成分，培養(yǎng)基A發(fā)酵菌絲體甘露醇含量為7.53％，SOD酶酶活為358.

5、9U/g；培養(yǎng)基B發(fā)酵菌絲體測得胞內(nèi)含有17種氨基酸，其中必需氨基酸含量占氨基酸總量的40.43％，甘露醇含量為6.75％，SOD酶酶活為515.4U/g；與市場現(xiàn)有產(chǎn)品進(jìn)行了比較，培養(yǎng)基B茵絲體腺苷含量為金水寶膠囊的1.25倍，培養(yǎng)基B菌絲體腺苷含量也高于百令膠囊；甘露醇含量以百令膠囊最高，兩種樣品甘露醇含量與金水寶相當(dāng)，SOD酶酶活以培養(yǎng)基B發(fā)酵菌絲體最高，其次是培養(yǎng)基A發(fā)酵菌絲體，酶活分別是金水寶的2.44和1.69倍，百令膠囊的