鈣激活中性蛋白酶2對MCF-7乳腺癌細胞Myc-nick形成的影響.pdf

1、目的：通過觀察鈣激活中性蛋白酶2（Calpain-2）及雌激素（E2）對MCF-7乳腺癌細胞中原癌基因C-myc及其小片段（Myc-nick）蛋白表達水平的影響，探討Calpain-2對MCF-7乳腺癌細胞Myc-nick的作用途徑。
　　方法：1、采用MCF-7乳腺癌細胞為實驗模型細胞，給予不同細胞培養(yǎng)密度，給予不同濃度雌激素（E2）、表皮生長因子(EGF)和胰島素(insulin)刺激后，蛋白免疫印跡法(Western blo

2、t)檢測Myc-nick的形成條件；2、脂質體轉染方法構建Calpain-2基因沉默的MCF-7細胞和轉染空載體的MCF-7細胞，采用Western blot法檢測Calpain-2對Myc-nick形成和C-myc（T58）磷酸化的影響、E2對Calpain-2沉默的MCF-7細胞中 C-myc、Myc-nick和C-myc（T58）磷酸化水平的影響、G-1（G蛋白耦聯受體-30阻斷劑）和4-羥基他莫昔芬（雌激素受體阻斷劑）對E2上調

3、Myc-nick的形成和促進C-myc（T58）磷酸化的影響。
　　結果：1、MCF-7細胞在高密度（種植細胞數為9×107個/皿和12×107/皿）培養(yǎng)時，C-myc剪切增強，Myc-nick形成增多（P＜0.01 v.s.低密度培養(yǎng)組）；E2（10-9~10-7g/mL）和胰島素（10~1000μg/mL）可促進C-myc水解，使Myc-nick形成增多（P＜0.05 v.s. Control）； EGF(10-9~10-8m

4、ol/L)可抑制C-myc水解，使Myc-nick形成減少（P＜0.01 v.s.Control）；2、Calpain-2基因沉默的MCF-7細胞Myc-nick的形成被完全抑制，C-myc（T58）磷酸化也被顯著抑制（P＜0.01 v.s. Control）；E2刺激Calpain-2基因沉默的MCF-7細胞時，C-myc表達沒有變化，也不能逆轉Calpain-2基因沉默對C-myc水解的影響；在Calpain-2基因沉默條件下，E2

5、可以一定程度促進MCF-7細胞C-myc（T58）磷酸化（P＜0.05 v.s. Control）；G-1明顯減弱了E2上調Myc-nick形成的作用（P＜0.05 v.s. Control），而4-羥基他莫昔芬對E2上調Myc-nick形成沒有明顯作用；G-1和4-羥基他莫昔芬對E2引起C-myc（T58）磷酸化的作用影響不大。
　　結論：MCF-7乳腺癌細胞中有明顯的C-myc表達，MCF-7細胞高密度時細胞中有Myc-nic