含CDglyES的雙功能融合基因的重組腺病毒對放療增敏作用的實驗研究.pdf

1、天津醫(yī)科大學碩士學位論文含CDglyES的雙功能融合基因的重組腺病毒對放療增敏作用的實驗研究姓名：孫健申請學位級別：碩士專業(yè)：腫瘤學指導教師：朱曉代20030601顧j_研究生學位論文含CDglyES的雙功能融合基因的重組腺病毒對放療增敏作用的實驗研究摘要本研究首先用PCR法從課題組構建的含cD基因的重組腺病毒(rAd—CD)中擴增出cD基因，將其插入腺病毒穿梭質粒(pAdTrackCMV)，而后從含Es基因的分泌型表達質粒DEZZ—1

2、8一ES中擴增出glyES基因，將兩者融合構建成含CDglyES融合基因的腺病毒穿梭質粒pAdTrackCMV—CD。然后轉化大腸桿菌BJ5183，構建出重組腺病毒質粒pAdTrackCMV—CDglyES，用卡那霉素篩選重組質粒，用限制性內切酶酶切、PCR擴增和測序對插入基因進行鑒定。然后經脂質體介導轉染293細胞進行包裝和擴增，借助報告基因監(jiān)控和篩選重組腺病毒。采用氯化銫密度梯度離心純化病毒，用TCID。。法滴定其濃度。為了證實融合

3、基因CDglyES具有雙重活性，進行了初步的體外抑瘤試驗。將純化重組腺病毒稀釋成l10”TCID。／L，分別感染肝癌細胞株SMMC一7721和宮頸癌細胞株Hela24小時，給予前藥5FC，繼續(xù)培養(yǎng)48小時后，檢測腫瘤細胞生長抑制率；并與對照重組病毒rAdCD和rAdLacZ的腫瘤細胞生長抑制率進行比較。結果顯示融合基因系統(tǒng)對SMMC7721細胞的抑制率達782％，與rAd—LacZ／5一FC(522％)系統(tǒng)比較有顯著性差異，PO5。這一