Wnt-β-catenin通路及mir-200a在高糖誘導的人足細胞損傷中的作用.pdf

1、目的:
　　觀察高糖刺激人足細胞時是否引起Wnt/β-catenin通路激活，及對miR-200a和足細胞標志蛋白nephrin表達的影響，初步探討Wnt/β-catenin通路和miR-200a與足細胞損傷的關(guān)系。轉(zhuǎn)染miR-200a-3pmimics至足細胞，檢測高糖刺激足細胞不同時間miR-200a、β-catenin、nephrin的表達變化，觀察miR-200a-3p mimics對人足細胞Wnt/β-catenin通路

2、活性的影響及能否減輕足細胞損傷。
　　方法:
　　以分化成熟的人足細胞為研究對象，隨機分為:正常對照組，25mM高糖分別刺激6、12、24小時組，及25mM甘露醇等滲對照組，采用實時定量PCR方法檢測β-catenin、nephrin mRNA以及miR-200a的表達水平;采用蛋白印跡方法測定β-catenin、nephrin蛋白表達水平。
　　將miR-200a-3p mimics轉(zhuǎn)染至分化成熟的足細胞，分組如下:

3、(1)高糖組;(2)轉(zhuǎn)染miR-200a-3p mimics+高糖刺激6h組(3)轉(zhuǎn)染miR-200a-3p mimics+高糖刺激12h組(4)轉(zhuǎn)染miR-200a-3p mimics+高糖刺激24h組(5)轉(zhuǎn)染miR-200a mimics negative control+高糖刺激24h組。采用實時定量PCR方法檢測β-catenin、nephrin mRNA及 miR-200a的表達水平;采用蛋白印跡檢測β-catenin、ne

4、phrin蛋白表達水平。
　　結(jié)果:
　　(1)人足細胞正常培養(yǎng)條件下表達nephrin，miR-200a，表達少量β-catenin。
　　(2)人足細胞經(jīng)高糖刺激后，β-catenin mRNA和蛋白表達量隨刺激時間的延長逐漸上調(diào)。甘露醇組β-catenin mRNA表達量與對照組相比差異均無統(tǒng)計學意義。
　　(3)人足細胞經(jīng)高糖刺激后，nephrin mRNA和蛋白表達量隨刺激時間的延長逐漸下調(diào)。甘露醇組n

5、ephrin mRNA表達量與對照組相比差異均無統(tǒng)計學意義。
　　(4)人足細胞經(jīng)高糖刺激后，miR-200a的表達量隨刺激時間的延長逐漸下調(diào)，其中高糖刺激12h和24h組與對照組比較，差異有統(tǒng)計學意義。甘露醇組與對照組相比差異均無統(tǒng)計學意義。
　　(5) miR-200a-3p mimics轉(zhuǎn)染至人足細胞后，miR-200a的表達明顯上調(diào)。轉(zhuǎn)染miR-200a mimics negative control+高糖刺激24h

6、組miR-200a的表達量與高糖組比較差異無統(tǒng)計學意義。
　　(6)轉(zhuǎn)染miR-200a-3p mimics的人足細胞經(jīng)高糖刺激不同時間后，β-catenin mRNA和蛋白表達量逐漸下調(diào)。轉(zhuǎn)染miR-200a mimicsnegative control+高糖刺激24h組β-catenin mRNA和蛋白的表達量與高糖組比較差異無統(tǒng)計學意義。
　　(7)轉(zhuǎn)染miR-200a-3p mimics的人足細胞經(jīng)高糖刺激不同時間后

7、，nephrin mRNA和蛋白表達量逐漸上調(diào)。轉(zhuǎn)染miR-200a mimicsnegative control+高糖刺激24h組nephrin mRNA和蛋白的表達量與高糖組比較差異無統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)論:
　　(1)高糖刺激能使人足細胞Wnt/β-catenin通路激活，足細胞標志蛋白nephrin表達下調(diào)。
　　(2) miR-200a在人足細胞有表達，高糖刺激能下調(diào)其表達，且呈時間依賴性。
　　(3)