添加COX-2抑制劑塞來昔布治療難治性癲癇模型大鼠的研.pdf

1、目的：將COX-2抑制劑與抗癲癇藥物的聯(lián)合用于難治性癲癇治療,觀察難治性癲癇的發(fā)作的情況,探討抗癲癇藥聯(lián)合COX-2抑制劑治療難治性癲癇的機制,為臨床治療難治性癲癇提供一種新思路。方法：1、實驗分組:本實驗設(shè)立5個實驗組,分別為假手術(shù)組,難治性癲癇模型生理鹽水治療組(生理鹽水組)、難治性癲癇模型卡馬西平治療組(卡馬西平治療組)、難治性癲癇模型卡馬西平聯(lián)合塞來昔布治療組(聯(lián)合治療組)、難治性癲癇模型塞來昔布治療組(塞來昔布治療組)。2、動

2、物模型的建立:a、模型組:采用海人酸海馬快速點燃方法建立癲癇大鼠模型,即將海人酸(Kainic Acid,KA)1.5ug(1ug/ul)定點注入wistar大鼠右側(cè)海馬CA3區(qū)位置,注射區(qū)和額竇安裝電極,縫合后觀察。按照 Racines分級進行行為觀察同時進行腦電圖檢測,若大鼠在0.5-6小時內(nèi)出現(xiàn)3-5級癇性發(fā)作且腦電圖都異常,表明癲癇模型造模成功。b、假手術(shù)組:將等量的生理鹽水注入大鼠右側(cè)海馬CA區(qū)注射,注射區(qū)和額竇安裝電極,縫合

3、后觀察3、難治性癲癇模型的建立:卡馬西平灌胃每日兩次,用量為125mg/kg,連續(xù)28天,然后觀察對大鼠的是否有癇樣發(fā)作并測一次腦電圖。4、篩選標準:a、腦電圖,正常的大鼠腦電圖表現(xiàn)為5-12 Hz的α波或17-19Hz的β波,波幅20-80μV,即基礎(chǔ)波,表現(xiàn)為有高幅尖波等異于基礎(chǔ)波的腦電波可作為診斷癲癇發(fā)作的依據(jù);b、按照Racines分級觀察:0級:正常;1級:面肌痙攣,如動須、節(jié)律性咀嚼等;2級:節(jié)律性點頭;3級:前肢痙攣;4級

4、:站立并前肢痙攣或強直;5級:持續(xù)站立或不能站立并跌倒,上下肢抽搐。發(fā)作達到1級及以上為異常。c、腦電圖結(jié)果和行為觀察結(jié)果都異常表明難治性癲癇模型造模成功。5、藥物治療:5組實驗組分別給予相應(yīng)組的藥物治療28天。6、檢測指標:觀察大鼠癲癇發(fā)作情況、腦電圖,p糖蛋白及COX-2免疫組化檢測實驗結(jié)果。結(jié)果：1、聯(lián)合治療的療效:治療28天后,大鼠癲癇發(fā)作程度及腦電圖結(jié)果表明聯(lián)合卡馬西平和塞來昔布治療難治性癲癇模型比卡馬西平單獨治療(p=0.0

5、44,p<0.05)和塞來昔布單獨治療(p=0.012,p<0.05)療效好。2、單藥物治療效果:塞來昔布治療組、卡馬西平治療組和生理鹽水治療組三組間的療效無差別(p=0.50,p>0.05),表明卡馬西平或塞來昔布單獨治療難治性癲癇無效果。3、、塞來昔布對難治性癲癇模型大鼠腦組織中COX-2和p糖蛋白的影響:通過免疫組化檢測發(fā)現(xiàn)聯(lián)合治療組中大鼠大腦中p糖蛋白及COX-2的含量比生理鹽水組4、大鼠腦組織中COX-2與p糖蛋白的相關(guān)性:治

6、療28天后,通過光密度分析大鼠腦組織中p糖蛋白與COX-2的含量,結(jié)果顯示:大鼠腦組織中COX-2與p糖蛋白呈直線正相關(guān)關(guān)系(r=0.777),提示在本實驗中p糖蛋白的表達與cox-2有關(guān)。5、COX-2表達高低對治療效果的影響:將卡馬西平治療組與聯(lián)合治療組的難治性癲癇模型大鼠中, COX-2低表達模型大鼠的藥物治療效果比高表達模型大鼠治療效果好(p=0.025,p<0.05)。6、p糖蛋白表達高低對治療效果的影響:在卡馬西平治療組與聯(lián)

7、合治療組的難治性癲癇模型大鼠中, p糖蛋白低表達模型大鼠的藥物治療效果比高表達模型大鼠治療效果好(p=0.028, p<0.05)。結(jié)論：cox-2抑制劑塞來昔布聯(lián)合抗癲癇藥物卡馬西平治療難治性癲癇模型大鼠能使大鼠發(fā)作明顯減少,同時COX-2及p糖蛋白表達減少,表明難治性癲癇的控制與COX-2及p糖蛋白的表達減少相關(guān)。推測塞來昔布聯(lián)合卡馬西平治療難治性癲癇的機制可能是通過COX-2抑制劑抑制COX-2表達,導(dǎo)致p糖蛋白表達減少,從而使卡