塞來昔布和青藤堿對脂多糖所致PD大鼠黑質(zhì)COX-2表達(dá)影響的實驗研究.pdf

1、背景與目的：帕金森?。≒arkinson's disease，PD）是一種常見的中樞神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病之一，其病因和發(fā)病機制尚不完全清楚。近年來越來越多的證據(jù)表明炎癥是介導(dǎo)黑質(zhì)多巴胺（Dopamine，DA）能神經(jīng)元變性及死亡的決定性因素，以小膠質(zhì)細(xì)胞激活為特征的神經(jīng)炎癥在PD發(fā)病機制中起重要作用。小膠質(zhì)細(xì)胞激活介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)對DA能神經(jīng)元損傷具有啟動作用，激活后的小膠質(zhì)細(xì)胞釋放大量的促炎癥反應(yīng)因子、細(xì)胞毒性因子、超氧化物、反應(yīng)性氧自由基

2、等，導(dǎo)致線粒體功能紊亂，并產(chǎn)生氧化應(yīng)激、興奮性毒素作用等為主的級聯(lián)反應(yīng)，這一病理過程促進(jìn)了PD的緩慢進(jìn)展。環(huán)氧化酶（Cyclooxygenase，COX）是花生四烯酸代謝產(chǎn)生前列腺素（Prostaglandin，PG）過程的主要限速酶，COX同工酶之-COX-2是一種重要的炎癥介質(zhì)，炎癥反應(yīng)伴隨COX-2表達(dá)增加與許多神經(jīng)疾病的病理過程中神經(jīng)元的變性和凋亡有關(guān)。因此針對PD抗炎治療的研究成為近年來PD的研究熱點之一。選擇性COX-2抑制

3、劑-塞來昔布（Celecoxib，CB）及中藥青藤堿（Sinomenine，SN）可阻斷COX-2介導(dǎo)的酶促反應(yīng)，抑制膠質(zhì)細(xì)胞激活為主的炎癥反應(yīng)，從而對DA能神經(jīng)元起神經(jīng)保護(hù)作用。但是研究PD炎癥機制的理想模型-脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）誘導(dǎo)的DA能神經(jīng)元變性中COX-2的作用尚不完全清楚，COX-2是否確實介導(dǎo)了DA能神經(jīng)元的炎癥損傷，選擇性COX-2抑制劑是否抑制該損傷途徑，亦不完全清楚。本研究通過黑質(zhì)內(nèi)

4、注射LPS制作PD動物模型，應(yīng)用CB和SN對實驗動物進(jìn)行干預(yù)，采用免疫組織化學(xué)及免疫印跡技術(shù)等觀察PD大鼠黑質(zhì)DA能神經(jīng)元損傷、COX-2蛋白表達(dá)的變化及二者相關(guān)性；同時觀察CB和SN對黑質(zhì)DA能神經(jīng)元的保護(hù)作用，探討COX-2在炎癥介導(dǎo)的DA能神經(jīng)元變性中的作用及抗炎藥物的神經(jīng)保護(hù)機制。為明確導(dǎo)致黑質(zhì)DA能神經(jīng)元死亡的分子通路，尋找新的治療方法提供實驗依據(jù)。迄今為止，相關(guān)研究國內(nèi)外鮮有報道。 材料和方法：48只雄性SD大鼠隨機

5、分成4組：對照組、PD組、CB組和SN組。黑質(zhì)內(nèi)立體定向注射5ug LPS或PBS，CB、SN及PD組在注射LPS前3h開始灌胃，劑量分別為20ml/kg/d、30ml/kg/d，PD組灌等量生理鹽水，持續(xù)到注射后14d。實驗終點腹腔內(nèi)注射阿樸嗎啡（Apomorphine，APO）來觀察大鼠行為學(xué)變化，采用免疫組織化學(xué)染色法檢測大鼠中腦黑質(zhì)酪氨酸羥化酶（Tyrosine hydroxylase，TH）及COX-2的陽性細(xì)胞數(shù)，并觀察小膠

6、質(zhì)細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化；免疫印跡法檢測黑質(zhì)TH及COX-2蛋白的表達(dá)情況。 結(jié)果：實驗各組大鼠在阿樸嗎啡注射后均可誘發(fā)向右側(cè)旋轉(zhuǎn)行為，對照組無任何行為學(xué)變化。PD組大鼠行為學(xué)變化最明顯，30min平均旋轉(zhuǎn)圈數(shù)為196．90±9．52，CB組及SN組30min平均旋轉(zhuǎn)圈數(shù)分別為109．30±9．38、98．79±8．81，與PD組相比，旋轉(zhuǎn)圈數(shù)明顯減少（P<0．01）。與對照組相比，PD組注射側(cè)TH陽性細(xì)胞數(shù)明顯減少，TH蛋白表達(dá)亦明

7、顯下降（P<0．01）；同時，其黑質(zhì)COX-2陽性細(xì)胞數(shù)增多，COX-2蛋白表達(dá)亦增高（P<0．01），且大部分小膠質(zhì)細(xì)胞呈“阿米巴樣”激活狀態(tài)。CB組、SN組較PD組黑質(zhì)TH陽性細(xì)胞數(shù)增多，TH蛋白表達(dá)亦增高（P<0．01）；COX-2陽性細(xì)胞數(shù)減少，COX-2蛋白表達(dá)下降（P<0．01），且激活狀態(tài)的小膠質(zhì)細(xì)胞減少。CB組與SN組組間比較，SN組TH陽性細(xì)胞數(shù)及TH蛋白表達(dá)增加，COX-2陽性細(xì)胞數(shù)及COX-2蛋白表達(dá)下降，差異顯著