基質金屬蛋白酶-7通過誘導細胞離解參與調控胰腺癌細胞侵襲轉移的分子機制.pdf

1、診斷胰腺癌時，通常已出現局部或遠隔轉移，以至于無法進行根治性手術治療。目前胰腺癌細胞侵襲轉移的分子機制尚未完全明確。目前已知癌細胞從原發(fā)部位的解離是侵襲轉移過程中重要的第一步，明確癌細胞解離的分子機制有助于闡明胰腺癌侵襲轉移的分子機制，從而為開發(fā)針對胰腺癌侵襲轉移的新型診斷和治療方法提供新的靶標。
　　 前期研究中建立兩種具有不同侵襲轉移能力的倉鼠胰腺癌細胞系：非解離型低轉移株細胞PC-1和解離型高轉移株細胞PC-1.0,表現為

2、完全不同的生長方式。非解離型低轉移株細胞PC-1呈島樣細胞克隆方式生長，解離型高轉移株細胞PC-1.0呈單個細胞方式生長。此外，EGFR介導的MEK2/ERK2信號轉導通路通過破壞解離非解離型胰腺癌細胞間的緊密連接，從而參與調控胰腺癌細胞的解離及侵襲轉移。
　　 另外，基質金屬蛋白酶-7(Matrix metalloproteinase-7，MMP-7)可以分解很多底物，例如：纖維蛋白、層粘連蛋白、蛋白聚糖、彈性蛋白、明膠、Ⅳ型

3、膠原、聚集蛋白聚糖、巢蛋白[11]。MMP-7在其他蛋白激酶(纖溶酶原、MMP-1、MMP-2、MMP-9等)活化過程中也起著重要的作用。同時，MMP-7較其它MMP分子在胰腺癌侵襲的程度、淋巴結和遠處轉移、以及進展期腫瘤的發(fā)展中起著更加重要的作用。但是目前MMP-7調控侵襲轉移過程的具體機制尚未完全明確。
　　 目的：
　　 本研究通過檢測MMP-7和緊密連接蛋白的表達，進一步闡明MMP-7參與調控胰腺癌細胞解離及侵襲

4、轉移的分子機制。
　　 材料與方法：
　　 一、材料
　　 利用倉鼠解離型高轉移株胰腺癌細胞(PC-1.0)和非解離型低轉移株胰腺癌細胞(PC-1)，以RPMI-1640培養(yǎng)液培養(yǎng)，并加10％的胎牛血清、100U/ml的青霉素G和100ug/ml的鏈霉素，于37℃、含5％CO2和95％空氣的孵箱中培養(yǎng)。
　　 二、方法
　　 利用兔抗人的MMP-7、claudin-1、occludin和Z0-1的

5、多克隆抗體為一抗。用若丹明標記的熒光抗體做為二抗。我們應用細胞體外侵襲實驗和Western雜交來明確MMP-7參與調控胰腺癌細胞侵襲轉移的分子機制。
　　 結果：
　　 一、Western雜交檢測胰腺癌中MMP-7的表達結果
　　 Western雜交結果顯示MMP-7在細胞中以前酶原的形式存在(倉鼠胰腺癌細胞中分子量為27kDa，人胰腺癌細胞中分子量為28kDa)。僅在PC-1.0和AsPC-1細胞的培養(yǎng)基上清中

6、檢測出活化型MMP-7蛋白(倉鼠胰腺癌細胞分子量為17kDa，人胰腺癌細胞分子量為18kDa)。盡管在未處理的PC-1和Capan-2細胞培養(yǎng)基上清中前MMP-7蛋白表達較強，但未檢測出活化的MMP-7蛋白表達。此外，AG1478(EGFR抑制劑)或U0126(MEK抑制劑)明顯抑制上述胰腺癌細胞內及培養(yǎng)液上清中MMP-7的表達。
　　 二、免疫組化的結果顯示
　　 MMP-7破壞細胞間的緊密連接，并誘導緊密連接蛋白cl

7、audin-1，occludin和Z0-1轉移到細胞質中，調控胰腺癌細胞的解離。
　　 三、體外侵襲實驗的結果顯示
　　 MMP-7誘導非解離型胰腺癌細胞的侵襲能力增強。而原本侵襲能力較強的PC-1.0和AsPC-1細胞，在加入AG1478或U0126后，細胞侵襲能力受到抑制。
　　 結論：
　　 MMP-7可通過破壞細胞間的緊密連接并誘導緊密連接蛋白的移位，增強胰腺癌細胞的體外侵襲能力，誘導胰腺癌的細胞