4-1BBL逆向信號對肺癌細(xì)胞及Treg細(xì)胞生物學(xué)行為的影響.pdf

1、4-1BBL/4-1BB是協(xié)同刺激分子TNF/TNFR超家族中的重要成員,通過介導(dǎo)雙向協(xié)同刺激信號(正向信號和逆向信號)發(fā)揮生物學(xué)作用。最初的研究發(fā)現(xiàn),4-1BBL/4-1BB在抗原提呈和細(xì)胞毒性T細(xì)胞相互作用過程中起著十分重要的作用。進(jìn)而發(fā)現(xiàn),4-1BBL/4-1BB是連接機(jī)體適應(yīng)性免疫和先天性免疫的重要橋梁,是調(diào)節(jié)機(jī)體免疫系統(tǒng)和免疫應(yīng)答的重要成分,也是參與機(jī)體炎癥、腫瘤和自身免疫等病理過程的重要因素。因此,研究者們試圖通過干預(yù)和調(diào)節(jié)

2、4-1BBL/4-1BB信號,激發(fā)機(jī)體的抗感染免疫和抗腫瘤免疫應(yīng)答。
　　 肺癌是在我國乃至全世界范圍內(nèi)的高發(fā)生率和高死亡率的腫瘤之一。我們的研究發(fā)現(xiàn)4-1BBL高表達(dá)于肺癌患者的癌瘤組織以及外周血Treg細(xì)胞,作為重要的協(xié)同刺激分子4-1BBL及其介導(dǎo)的逆向信號在肺癌的病理過程中有何生物學(xué)意義?圍繞這一科學(xué)問題本研究分為一下兩個部分進(jìn)行探討。
　　 第一部分4-1BBL在肺癌細(xì)胞的表達(dá)及其生物學(xué)作用研究目的:探討4-1

3、BBL在肺癌組織的表達(dá)及其生物學(xué)作用。
　　 研究方法:免疫組織化學(xué)分析4-1BBL在肺癌組織中的表達(dá)；采用免疫熒光和流式細(xì)胞術(shù)以及RT-PCR從蛋白質(zhì)水平和mRNA水平檢測肺癌細(xì)胞株95D細(xì)胞4-1BBL的表達(dá)；利用95D細(xì)胞作為研究模型,采用單抗1F1激發(fā)95D細(xì)胞的4-1BBL逆向信號,細(xì)胞計(jì)數(shù)法觀察4-1BBL逆向信號對95D細(xì)胞生長的影響,采用流式細(xì)胞術(shù)檢測95D細(xì)胞膜CXCR-4、CD95L和PD-L1表達(dá)水平的改變

4、,利用Transwell分析95D細(xì)胞遷移能力的變化。
　　 結(jié)論:肺癌患者的癌瘤組織表達(dá)4-1BBL分子；95D細(xì)胞表達(dá)膜型4-1BBL分子,可作為研究4-1BBL逆向信號的模型；單抗1F1激發(fā)的4-1BBL逆向信號可刺激95D細(xì)胞增殖,上調(diào)表達(dá)CD95L和PD-L1分子以及上調(diào)表達(dá)CXCR4,并增強(qiáng)95D細(xì)胞的遷移能力。
　　 第二部分4-1BBL在肺癌患者外周血Treg細(xì)胞的表達(dá)及其生物學(xué)作用研究目的:4-1BBL

5、分子在肺癌患者來源的Treg細(xì)胞的表達(dá)及其對Treg細(xì)胞增殖和免疫抑制活性的影響。
　　 研究方法:分離肺癌患者外周血單個核細(xì)胞(PBMC),采用免疫熒光和流式細(xì)胞術(shù)檢測CD4+CD25highTreg細(xì)胞4-1BBL的表達(dá)；從PBMC中富集CD4+CD25+CD127-Treg細(xì)胞,利用可激發(fā)4-1BBL逆向信號的單抗1F1激發(fā)Treg細(xì)胞的4-1BBL逆向信號,采用細(xì)胞計(jì)數(shù)法觀察4-1BBL逆向信號對Treg細(xì)胞增殖的影響,

6、采用細(xì)胞內(nèi)染色和流式細(xì)胞術(shù)檢測Treg細(xì)胞Foxp3的表達(dá)變化,利用ELISA方法檢測Treg細(xì)胞釋放IL-10和TGF-β的變化。
　　 結(jié)論:肺癌患者外周血來源Treg細(xì)胞高表達(dá)4-1BBL分子；單抗1F1蛋白激發(fā)的4-1BBL逆向信號可刺激Treg細(xì)胞增殖,上調(diào)表達(dá)Foxp3,并促進(jìn)Treg細(xì)胞釋放IL-10和TGF-β。
　　 總之,肺癌患者中癌細(xì)胞和Treg細(xì)胞均表達(dá)功能性4-1BBL分子,其介導(dǎo)的4-1BBL