通過ROS和線粒體凋亡途徑抑制HO-1增強(qiáng)多西他賽誘導(dǎo)PC-3細(xì)胞凋亡.pdf

1、目的:探索HO-1在激素非依賴性前列腺癌化療抵抗中的作用及其分子機(jī)制。
　　在西方發(fā)達(dá)國家，前列腺癌是最常見的腫瘤，居癌死因的第二位。幾乎所有的前列腺癌患者接受雄激素去勢(shì)治療后18-24個(gè)月均會(huì)發(fā)展為激素非依賴性前列腺癌，此時(shí)轉(zhuǎn)移率很高。雖然使用了各種抗癌藥物以緩解疼痛，但總體生存率沒有得到改善，并且對(duì)標(biāo)準(zhǔn)的放化療產(chǎn)生了耐藥性。化療抵抗是影響晚期前列腺癌患者生存和生活質(zhì)量的主要障礙。因此，探索激素非依賴性前列腺癌化療抵抗中分子靶點(diǎn)

2、和發(fā)展全新的治療策略是至關(guān)重要的。
　　HO-1是一種細(xì)胞保護(hù)性酶類，是體內(nèi)抵抗氧化應(yīng)激主要的防御機(jī)制。其代謝產(chǎn)物有二價(jià)鐵，一氧化碳，膽紅素。多種刺激均可誘導(dǎo)HO-1生成，如低氧，重金屬，化療藥物以及氧化應(yīng)激。HO-1具有抗炎，抗氧化，抗凋亡等生理作用。最近，一些研究結(jié)果證實(shí)相比周圍正常組織，腫瘤組織中的內(nèi)源性HO-1表達(dá)增多，如鱗癌，黑色素瘤，惡性膠質(zhì)瘤，淋巴瘤等。同時(shí)，用siRNA敲低HO-1后可抑制膀胱癌的生長。上述結(jié)果均說

3、明HO-1是促腫瘤因子。更為重要的是，HO-1可抑制化療藥物誘導(dǎo)的凋亡，特異性抑制HO-1基因或抑制HO-1活性可增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性。在化療藥物引發(fā)的氧化應(yīng)激環(huán)境下，腫瘤細(xì)胞本身可能上調(diào)抗氧化酶系統(tǒng)，增強(qiáng)抗凋亡能力以抵御抗癌藥物引起的氧化應(yīng)激，這可能是產(chǎn)生化療抵抗的主要原因之一，但尚缺乏有力的證據(jù)。作為強(qiáng)大的抗氧化和抗凋亡酶，抑制HO-1自理論上可以增強(qiáng)化療藥物敏感性。然而，抑制HO-1增強(qiáng)化療藥物的敏感性的確切機(jī)制尚不完全

4、明了。
　　因此本研究在以往實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)之上，以人前列腺癌標(biāo)本和PC-3細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，通過觀察人前列腺癌標(biāo)本探索HO-1是否與臨床前列腺癌病理特征間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)關(guān)系及其與凋亡相關(guān)蛋白BCL-2和Bax間的關(guān)系;通過觀察HO-1是否影響B(tài)CL-2、Bax、caspase-3、caspase-9及細(xì)胞色素C的表達(dá)，并分析其表達(dá)與細(xì)胞凋亡的關(guān)系，闡明HO-1在激素非依賴性前列腺癌化療抵抗中的作用及其分子機(jī)制，為臨床選擇有效治療方法提供實(shí)驗(yàn)依

5、據(jù)。
　　方法:常規(guī)培養(yǎng)人激素非依賴性前列腺癌細(xì)胞（PC-3細(xì)胞），分為正常組、Znpp組、Hemin組、多西他賽組、多西他賽+Znpp組、多西他賽+Hemin組。
　　1免疫組化染色分析HO-1、BCL-2、Bax蛋白的表達(dá)。
　　2 MTT法分析各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞存活率。
　　3 DCFH-DA法檢測(cè)活性氧物質(zhì)(ROS)含量。
　　4 TUNEL法檢測(cè)細(xì)胞凋亡率。
　　5 Western blot法檢測(cè)

6、HO-1、Bcl-2、Bax、caspase-3、caspase-9及細(xì)胞色素C蛋白含量。
　　結(jié)果:
　　1 HO-1免疫組化表達(dá)與前列腺癌臨床病理特點(diǎn)間的關(guān)系。
　　HO-1表達(dá)量與臨床分期，術(shù)前PSA，精囊侵犯，Gleason分級(jí)呈正相關(guān)。與患者年齡，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，尿道侵犯無關(guān)。
　　2在人前列腺癌標(biāo)本中HO-1與凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2和Bax免疫組化表達(dá)中的關(guān)系。
　　Bcl-2表達(dá)隨HO-1表達(dá)增高

7、而增高，Bax則呈相反的趨勢(shì)。
　　3 MTT法分析Hemin和Znpp對(duì)多西他賽誘導(dǎo)的PC-3細(xì)胞毒性的作用。
　　4抑制HO-1增強(qiáng)多西他賽誘導(dǎo)的PC-3細(xì)胞凋亡。
　　5多西他賽誘導(dǎo)ROS生成以及抑制HO-1可增強(qiáng)多西他賽誘導(dǎo)ROS生成。
　　6多西他賽誘導(dǎo)的ROS上調(diào)Bax，下調(diào)Bcl-2表達(dá)，而HO-1則可逆轉(zhuǎn)。
　　7抑制HO-1增強(qiáng)多西他賽誘導(dǎo)的線粒體凋亡途徑。
　　結(jié)論:HO-1在前列