浙江省兩地草莓灰霉病菌對(duì)異菌脲和嘧霉胺的抗藥性評(píng)價(jià)及其分子機(jī)制研究.pdf

1、由赤葡萄孢菌(Botrytis cinerea Pers.)引起的草莓灰霉病是草莓的最重要病害之一，一般年份造成的損失大約20％～30％，流行年份損失可達(dá)50％以上。由于缺乏抗灰霉病的種質(zhì)資源，化學(xué)防治仍然是防治草莓灰霉病的主要措施之一。然而，由于灰葡萄孢菌的繁殖系數(shù)大、自發(fā)突變幾率高，以及存在異核和準(zhǔn)性生殖現(xiàn)象，病菌變異潛力大，在藥劑持續(xù)篩選壓力作用下，頻率極低的抗藥性突變體得以保存，其種群也不斷壯大，從而導(dǎo)致藥劑防治效果下降，甚至失

2、效。掌握田間抗藥性亞群體的頻率和抗性水平，對(duì)及時(shí)調(diào)整用藥策略，提高藥劑防治效果、減少藥劑的使用量具有較大的現(xiàn)實(shí)意義。此外，了解病菌抗性分子機(jī)制，不僅可為建立抗藥性的快速分子監(jiān)測(cè)體系、檢測(cè)田間抗藥性種群的消長(zhǎng)動(dòng)態(tài)奠定基礎(chǔ)，同時(shí)也可為研究開發(fā)抗抗藥性策略提供理論依據(jù)。 本研究采用菌絲生長(zhǎng)速率法測(cè)定采自浙江省建德市和杭州下沙區(qū)兩個(gè)草莓主產(chǎn)區(qū)的98個(gè)灰葡萄孢菌(Botrytis cinema Pers.)菌株對(duì)殺菌劑異菌脲的抗性。研究結(jié)

3、果表明建德下涯和廟頭張兩地區(qū)已存在抗異菌脲的菌系，抗性頻率達(dá)17.5％，最高抗性菌株的抗性系數(shù)為12.32。而杭州下沙和建德的楊村橋地區(qū)則尚未發(fā)現(xiàn)抗性菌系。通過擴(kuò)增和測(cè)序，比較研究了異菌脲敏感和抗性菌株BcOS1基因N-端氨基酸重復(fù)區(qū)段的526bp序列，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，抗性菌株存在兩種分子變異類型，即BcOS1的365位氨基酸從異亮氨酸(Ile)變?yōu)榻z氨酸(Ser)，369和373位同時(shí)從谷氨酸(Gin)和天冬門氨酸(Asn)變成脯氨酸(Pr

4、o)和絲氨酸(Ser)，以前一個(gè)類型為主，占8個(gè)抗性菌株中的7個(gè)。 以同樣方法評(píng)價(jià)上述菌株中42個(gè)菌株對(duì)嘧霉胺(pyimethanil)的抗性情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，高抗菌株占19.05％，中抗菌株占2.38％，低抗菌株占2.38％，敏感菌株占76.19％。最抗菌株JDxy13的抗性系數(shù)高達(dá)387.3，8個(gè)高抗菌株中的7個(gè)來自建德下涯地區(qū)，由此可見建德市下涯地區(qū)存在抗嘧霉胺的灰霉菌。 炭疽病是草莓上另一大病害。據(jù)文獻(xiàn)記載引起草莓

5、炭疽病的病菌至少有三個(gè)種。對(duì)來自建德市下涯和楊村橋，以及杭州下沙草莓短縮莖或匍匐莖上的44個(gè)草莓炭疽菌菌株形態(tài)學(xué)、培養(yǎng)性狀的研究表明，病菌分生孢子大小為16～20μm×4～5μm，圓柱狀，直形，兩端鈍圓，中部含有油球；培養(yǎng)基上的菌落尚未見剛毛。在PDA培養(yǎng)基上菌落特征可分兩類，其一(38個(gè)菌株)為菌落灰白色，易產(chǎn)孢；其二(6個(gè)菌株)則菌絲灰黑色，能分泌色素，導(dǎo)致培養(yǎng)基變黑色，很少產(chǎn)孢。提取所有菌株的基因組DNA，根據(jù)已經(jīng)報(bào)道的針對(duì)尖孢炭