兩種單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株的建立.pdf

1、目的:目前,念珠菌已經(jīng)成為醫(yī)源性感染中常見的病原菌,而白念珠菌又是念珠菌感染中居首位的病原菌.白念珠菌不僅可以引起機(jī)體皮膚和粘膜的損害,還可以導(dǎo)致系統(tǒng)性的感染.白念珠菌粘附、定殖于宿主的內(nèi)皮細(xì)胞或粘膜的表面,進(jìn)一步達(dá)到侵襲宿主的目的.能夠快速、早期地診斷白念珠菌系統(tǒng)性感染對(duì)指導(dǎo)臨床的治療有著重要意義.現(xiàn)階段對(duì)白念珠菌系統(tǒng)性感染的診斷方法,尤其是能早期、敏感而特異性的檢測(cè),仍然是缺乏的.臨床研究已經(jīng)把注意力集中于檢測(cè)患者血液中的白念珠菌特

2、異性抗原成分及其代謝產(chǎn)物上.該研究目的在于制備兩種抗念珠菌特異抗原單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株,為建立快速、早期診斷系統(tǒng)性念珠菌感染提供新的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法;同時(shí)也初步探討抗白念珠菌芽管胞壁外膜單克隆抗體在體外試驗(yàn)中抑制白念珠菌相變的作用.方法:分別用酵母菌烯醇化酶和帶芽管白念珠菌標(biāo)準(zhǔn)菌株{ATCC-90028}孢子作為抗原,免疫BALB/c小鼠,利用雜交瘤細(xì)胞融合技術(shù),制備出抗烯醇化酶和抗白念珠菌芽管胞壁外膜單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株,并對(duì)兩種雜

3、交瘤細(xì)胞株進(jìn)行相關(guān)鑒定;通過(guò)體外白念珠菌芽管誘導(dǎo)抑制實(shí)驗(yàn),觀察抗白念珠菌芽管胞壁外膜單克隆抗體能否抑制白念珠菌芽管形成,影響白念珠菌菌相的轉(zhuǎn)換,并對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理.結(jié)果:建立了2株分泌抗烯醇化酶單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株,分別命名為Mab03.3G5-F3-F5、Mab03.4G6-F3-C7,并對(duì)Mab03.3G5-F3-F5單抗進(jìn)行鑒定.小鼠腹水單克隆抗體的最高稀釋度達(dá)1:12800以上;單克隆抗體的重鏈屬于IgG1亞類,輕鏈

4、屬于κ型;Western Blotting顯示這2株雜交瘤細(xì)胞分泌的單克隆抗體皆能與烯醇化酶抗原(48kD)特異性地結(jié)合,證實(shí)是抗烯醇化酶的單克隆抗體.成功地制備了1株分泌抗白念珠菌芽管胞壁外膜抗原單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株,命名為Mab03.2C1-C2.其小鼠腹水單克隆抗體的最高稀釋度達(dá)1:25600;單克隆抗體的重鏈屬于IgG1亞類,輕鏈屬于λ型;通過(guò)IIF,可見單抗能使白念珠菌芽管特異性染上熒光,而孢子上無(wú)熒光著色,證實(shí)了該單抗是

5、抗白念珠菌芽管胞壁外膜特異性抗原的單克隆抗體;經(jīng)Western Blotting證實(shí)Mab03.2C1-C2雜交瘤細(xì)胞分泌的單克隆抗體能與白念珠菌芽管表面抗原提取物特異性地結(jié)合,得知該單抗的靶位是在白念珠菌芽管胞壁外膜上分子量為156kD的抗原成分.抗白念珠菌芽管胞壁外膜單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株Mab03.2C1-C2所分泌的單克隆抗體對(duì)白念珠菌芽管的誘導(dǎo)具有顯著的抑制作用,影響白念珠菌菌相的轉(zhuǎn)換.結(jié)論:通過(guò)該次實(shí)驗(yàn),我們成功地制備2株抗

6、烯醇化酶單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株和1株抗白念珠菌芽管胞壁外膜抗原的單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株,并對(duì)其中Mab03.3G5-F3-F5和Mab03.2C1-C2 單抗進(jìn)行鑒定;抗白念珠菌芽管胞壁外膜抗原單克隆抗體的靶位是芽管胞壁外膜上分子量為156kD的抗原成分;同時(shí)得出抗白念珠菌芽管胞壁外膜抗原單克隆抗體Mab03.2C1-C2具有影響白念珠菌菌相轉(zhuǎn)換的作用的結(jié)論.該實(shí)驗(yàn)為進(jìn)一步早期、快速檢測(cè)系統(tǒng)性念珠菌病,開發(fā)系統(tǒng)性念珠菌病診斷試劑盒,以及