血清骨形成標(biāo)志物與骨骼縱向生長(zhǎng)關(guān)系的研究.pdf

1、目的：通過(guò)檢測(cè)骨形成標(biāo)志物-血清骨鈣蛋白（osteocalcin，OC）、堿性磷酸酶（alkaline phosphatase，AP）、Ⅰ型前膠原羧基端前肽（carboxyterminal propeptide of type Ⅰprocollagen，PICP）水平，探討骨形成標(biāo)志物與骨骼縱向生長(zhǎng)的關(guān)系，為評(píng)價(jià)骨骼縱向生長(zhǎng)篩選可靠有效的血清學(xué)指標(biāo)。
　　 方法：選擇剛斷乳3周齡清潔級(jí)純系SD大鼠20只。此時(shí)大鼠約相當(dāng)于人類的學(xué)

2、齡前期兒童。按體重隨機(jī)分為地塞米松組12只，對(duì)照組8只。根據(jù)《動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方法》給出的公式：公斤體重劑量（mg/kg）dB=dA·RB/RA·（WA/WB）1/3換算出大鼠的地塞米松劑量。dB為大鼠需要的每公斤體重劑量，dA是人的每公斤體重劑量，WA是人的標(biāo)準(zhǔn)體重，WB是大鼠的標(biāo)準(zhǔn)體重，RA是人的體型系數(shù)為0.1，RB是大鼠的體型系數(shù)為0.09。對(duì)于人，地塞米松劑量（dA）為0.15-0.3mg/kg，換算出大鼠的劑量為100-200μg/

3、100g。本研究中，選擇200μg/100g作為地塞米松干預(yù)劑量。地塞米松組大鼠每日腹腔注射地塞米松200μg/100g體重，對(duì)照組大鼠注射等容積生理鹽水，連用10天。此時(shí)大鼠約為人類青春發(fā)育前期。每日稱量體重。采用10％水合氯醛麻醉后宰殺大鼠，采集靜脈血，測(cè)量鼻尾長(zhǎng)。大鼠取俯臥位測(cè)量鼻尾長(zhǎng)，即大鼠俯臥狀態(tài)下，鼻尖到尾末端的距離。分離脛骨，測(cè)量脛骨長(zhǎng)度。脛骨的長(zhǎng)度為近端關(guān)節(jié)面和遠(yuǎn)端關(guān)節(jié)面之間的直線距離，每一脛骨同一人員測(cè)量3次，取平均值

4、。制備脛骨生長(zhǎng)板組織切片。將脛骨組織置于3.8％甲醛溶液固定，4℃，過(guò)夜。15％EDTA脫鈣2周。將脫鈣的脛骨組織置于4％多聚甲醛溶液固定，梯度酒精脫水（70％、80％、90％、95％、95％、100％），二甲苯透明，石蠟包埋，切片機(jī)做連續(xù)5微米切片后貼片。VG法、Masson三色法、Mallory三色法等組織學(xué)特殊染色方法，Leica Qwin數(shù)字圖像分析儀直接測(cè)量生長(zhǎng)板厚度、增值帶和肥大帶厚度。測(cè)定血清OC、AP、PICP濃度。SP

5、SS16.0統(tǒng)計(jì)軟件包處理數(shù)據(jù)。所有資料進(jìn)行方差齊性及正態(tài)分布的檢驗(yàn)，計(jì)量數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)注差（x±s）表示，兩組間比較用t檢驗(yàn)，兩變量之間相關(guān)性用Pearson相關(guān)分析。
　　 結(jié)果：
　　 1.地塞米松組大鼠體重、鼻尾長(zhǎng)、脛骨長(zhǎng)、生長(zhǎng)板總厚度、增殖帶厚度、肥大帶厚度分別為：97.71±8.95 g、27.82±1.03 cm、28.94±1.17 mm、4.01±0.28 μ m、1.98±0.13 μm、1.67±

6、0.18 μ m；對(duì)照組大鼠體重、鼻尾長(zhǎng)、脛骨長(zhǎng)、生長(zhǎng)板總厚度、增殖帶厚度、肥大帶厚度分別為：127.87±12.68g、30.29±0.97cm、30.54±1.06mm、5.53±0.46 μ m、2.25±0.30 μ m、2.86±O.19 μ m；兩組間比較，P<0.05，地塞米松組大鼠各項(xiàng)物理測(cè)量參數(shù)均顯著落后于對(duì)照組大鼠。
　　 2.地塞米松組大鼠血清OC、.AP、PICP水平分別為：0.48±0.15 ng/ml

7、、80.18±19.47 U/L、42.67±12.06 pg/ml；對(duì)照組大鼠血清OC、AP、PICP水平分別為：0.46±0.16 ng/ml、76.60±1.69 U/L、37.57±16.98 pg/ml，兩組間比較，P>0.05，OC、AP、PICP水平無(wú)明顯差異。
　　 3.地塞米松組大鼠體重、鼻尾長(zhǎng)、脛骨長(zhǎng)、生長(zhǎng)板總厚度、增殖帶厚度、肥大帶厚度和血清學(xué)指標(biāo)的相關(guān)性分析：肥大帶厚度與AP呈負(fù)相關(guān)，r=-0.605，p

8、=0.037。其余物理測(cè)量參數(shù)和血清學(xué)指標(biāo)均無(wú)相關(guān)性。
　　 4.對(duì)照組大鼠體重、鼻尾長(zhǎng)、脛骨長(zhǎng)、生長(zhǎng)板總厚度、增殖帶厚度、肥大帶厚度和血清學(xué)指標(biāo)的相關(guān)性分析：鼻尾長(zhǎng)及體重與PICP均呈正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別為r=0.725，p=0.042和r=0.820，p=0.013。其余物理測(cè)量參數(shù)和血清學(xué)指標(biāo)均無(wú)相關(guān)性。
　　 5.地塞米松組血清學(xué)各指標(biāo)之間的相關(guān)性分析：AP與PICP呈負(fù)相關(guān)，r=-0.606，p=0.037。其