血紅蛋白對于細(xì)菌刺激大鼠全血中性粒細(xì)胞產(chǎn)生生物學(xué)反應(yīng)的影響.pdf

1、血紅蛋白類氧載體由于其獨(dú)特的氧結(jié)合特性和正常的生理代謝途徑等優(yōu)點(diǎn)成為近年來血液代用品方面研究的重點(diǎn)，鑒于豬血紅蛋白具有較高相似性及穩(wěn)定性，是一種吸引力很強(qiáng)HBOCs規(guī)模生產(chǎn)原料選擇的對象。隨著HBOCs產(chǎn)品研究的不斷深入，對于HBOCs產(chǎn)品的安全性及有效性的研究就顯得尤為重要，近年來對于HBOCs產(chǎn)品的有效性研究已證明其良好的載氧釋氧能力，但許多產(chǎn)品在臨床研究期間出現(xiàn)了嚴(yán)重的不良反應(yīng)，在一定程度上限制了HBOCs的進(jìn)一步發(fā)展，因此對HB

2、OCs產(chǎn)品安全性的研究就顯得尤為重要。 中性粒細(xì)胞是生物體非特異性免疫系統(tǒng)中十分重要的組成部分，目前普遍認(rèn)為中性粒細(xì)胞是通過吞噬、滅活、消化等作用起到對外來物質(zhì)的殺傷與消滅功能。我們近期通過對中性粒細(xì)胞呼吸爆發(fā)的研究發(fā)現(xiàn)，中性粒細(xì)胞在受到細(xì)菌刺激后，先后產(chǎn)生兩個相互分離的ROS峰，其中峰Ⅰ的ROS產(chǎn)量較小，持續(xù)時間較短且耗氧量大：峰Ⅱ的ROS產(chǎn)量大，持續(xù)時間長但無明顯耗氧。通過中性粒細(xì)胞的殺菌實驗發(fā)現(xiàn)，中性粒細(xì)胞可在短時間內(nèi)(5

3、min內(nèi))滅活大量細(xì)菌，但吞噬細(xì)菌的中性粒細(xì)胞數(shù)量比率是隨時間延長而增加的，由此我們將中性粒細(xì)胞分為兩大類：易被外來物質(zhì)激活、吞噬和/或消化活性伴隨明顯耗氧的早期反應(yīng)中性粒細(xì)胞和激活緩慢、吞噬和/或消化活性不伴隨耗氧現(xiàn)象的遲緩反應(yīng)中性粒細(xì)胞。 本文在以上研究成果的基礎(chǔ)下，著重討論了血紅蛋白對細(xì)菌刺激大鼠全血中性粒細(xì)胞產(chǎn)生生物學(xué)反應(yīng)的影響。主要采用化學(xué)發(fā)光等檢測方法研究系統(tǒng)活性氧物質(zhì)生成的變化，用細(xì)菌培養(yǎng)方法研究中性粒細(xì)胞抑菌殺菌

4、機(jī)制，采用細(xì)胞培養(yǎng)、染色、光學(xué)顯微鏡形態(tài)學(xué)方法研究測定中性粒細(xì)胞吞噬功能。本文首先建立了穩(wěn)定的化學(xué)發(fā)光反應(yīng)系統(tǒng)，在最終確定反應(yīng)條件下，Luminol—H2O2-HRP化學(xué)發(fā)光反應(yīng)系統(tǒng)可在6min左右達(dá)到峰值，且峰值均在40萬光子數(shù)左右。之后在該化學(xué)發(fā)光反應(yīng)系統(tǒng)下研究了細(xì)菌刺激大鼠全血反應(yīng)系統(tǒng)中的各種因素對化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的影響，實驗結(jié)果得出，肝素、MEM及血紅蛋白均可不同程度的增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光反應(yīng)。但在細(xì)菌刺激大鼠全血化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)中，無論單體血

5、紅蛋白還是聚合血紅蛋白，血紅蛋白的影響作用同在化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)中的完全不同。隨著血紅蛋白濃度的增加，對化學(xué)系統(tǒng)的增強(qiáng)作用加大，對細(xì)胞系統(tǒng)中峰Ⅱ的抑制作用加大。排除其他可能影響因子，我們將血紅蛋白抑制細(xì)菌刺激大鼠全血化學(xué)發(fā)光的作用點(diǎn)定位到中性粒細(xì)胞，即遲緩反應(yīng)中性粒細(xì)胞。并且推測血紅蛋白通過某種胞外機(jī)制影響中性粒細(xì)胞的ROS生成量。 同時我們發(fā)現(xiàn)，血紅蛋白的加入可增強(qiáng)大鼠全血對于細(xì)菌的殺滅效率，但這種增強(qiáng)作用并不是通過增加吞噬作用達(dá)到