結締組織行長因子、核轉錄因子在糖尿病大鼠肺中的表達及苦參堿的干預作用.pdf

1、肺間質(zhì)纖維化(pulmonary interstitial fibrosis,PF)是一種原因不明、發(fā)病機制不清、缺乏治療手段的致命性彌漫性肺間質(zhì)病。近年來,越來越多的文獻報道結締組織生長因子(connective tissue growth factor,CTGF)與多種組織器官纖維化有密切的關系。由于病因復雜,發(fā)病機制尚未完全闡明,臨床治療效果不理想。近年來隨著對中醫(yī)中藥研究的深入,國內(nèi)研究證實苦參堿(Matrine)在抗肝臟、腎臟

2、纖維化中有一定的療效,但有關其對肺纖維化的作用,目前仍未見報道。
　　 多種因素產(chǎn)生的肺損害均可導致肺纖維化的發(fā)生。近年來,糖尿病(diabetes mellitus,DM)對肺的影響逐漸引起了大家的重視,已證實肺組織是DM損害的重要靶器官。有研究認為肺部病變可能與高血糖引起的非酶糖基化反應和糖基化終產(chǎn)物積累有關,肺賴氨酸氧化酶活性升高,氧化應激可能也是DM肺部病變的重要發(fā)病機制。DM是一種炎癥反應,作為細胞內(nèi)炎癥信號轉導通路的

3、調(diào)控中心的核轉錄因子-κB(nuclear transcription factor-κB,NF-κB)也在肺部病變中起重要作用。但DM能否導致肺纖維化目前國內(nèi)外鮮有報道。
　　 目的：
　　 觀察DM肺的病理改變,研究CTGF、NF-κB的表達情況,探討肺部病變可能的作用機制,并為臨床藥物治療找尋新的靶點。
　　 方法：
　　 雄性SD大鼠,隨機分為3組:1.對照組;2.模型組;3.苦參堿組。通過腹腔注

4、射鏈脲佐菌素(STZ55mg/kg腹腔注射1次)建立DM模型,苦參堿組在此后每天腹腔注射苦參堿(Matr.15mg/kg)5周。對照組注射相應劑量0.9％生理鹽水。分別在4周和6周處死大鼠,觀察肺系數(shù)比,檢測羥脯氨酸(HYP),進行CTGF、NF-κB檢測,并觀察光學顯微鏡下肺損傷的程度。本實驗通過實時定量RT-PCR測定各組中CTGF的含量,并用WesternBlot檢測NF-κB的蛋白表達水平,觀察各自在DM肺中的表達情況及其與肺纖

5、維化的關系,探討其可能的發(fā)病機制。
　　 結果：
　　 1.DM大鼠肺出現(xiàn)纖維化改變:本實驗通過腹腔注射鏈脲佐菌素誘導大鼠形成DM,以隨機血糖＞16.7mmol/L,尿糖強陽性作為DM動物模型建立標準。在實驗4周和6周時DM大鼠肺在顯微鏡下出現(xiàn)肺泡炎、肺纖維化樣改變,肺組織中HYP含量上升,并隨著病程逐漸增加。6周時肺系數(shù)增加,模型組的肺系數(shù)(1.369±0.204)與對照組(0.851±0.201)比較明顯升高(P＜0

6、.05),HYP含量增加,與對照組比較結果有統(tǒng)計學差異,顯微鏡下肺纖維化樣改變明顯。以上均為肺纖維化的基本特征,提示DM導致肺纖維化。
　　 2.模型組CTGF、NF-κB表達增加:實時定量RT-PCR檢測發(fā)現(xiàn)DM模型中CTGFmRNA的量逐漸上升,比正常對照組上升了約5.6倍(4周,P＜0.01)和6.1倍(6周,P＜0.01)。Western-Blot檢測顯示,在正常肺組織中有低水平的NF-κB/p65表達,誘導大鼠形成DM

7、4N時肺組織中NF-κB/p65表達明顯增高,達到正常對照組的4.4倍(P＜0.01),6周時為4.2倍(P＜0.01).
　　 3.苦參堿能抑制DM大鼠肺中CTGF、NF-κB/p651的表達:6周時苦參堿組肺系數(shù)(0.960±0.314)較模型下降(P＜0.05),HYP含量較模型組下降(P＜0.05),顯微鏡下觀察肺泡炎、肺纖維化樣程度較模型組減輕(P＜0.05,P＜0.01)。實時定量RT-PCR檢測發(fā)現(xiàn)4N時苦參堿組C

8、TGFmRNA的量上升,為正常對照組的約2.9倍(P＜0.05),比DM模型下降了22.6％(P＜0.05),6周時為正常對照組的2.1倍(P＜0.05),比DM模型組下降了55.9％(P＜0.01)。Western-Blot檢測顯示,4周時苦參堿組NF-κB/p65的量上升,比正常對照組上升約為2.6倍(P＜0.05),比DM模型下降了42.5％(P＜0.01),6周時比正常對照組上升約為2.2倍(P＜0.05),比DM模型下降了46