冬凌草甲素促進人前列腺腫瘤細胞P21表達并誘導自噬與凋亡的研究.pdf

1、從冬凌草中提取的萜類化合物冬凌草甲素(oridonin,ORI)能抑制多種腫瘤細胞增殖,并誘導其發(fā)生凋亡,但機制尚未闡明。近年文獻報道ORI是目前在臨床上廣泛應用于前列腺癌治療的PC-SPES方劑的重要活性化合物之一,本實驗研究ORI處理后前列腺癌細胞的形態(tài)學及分子生物學改變,旨在探討其抗前列腺癌的機制。我們應用體外培養(yǎng)前列腺癌激素非依賴型PC-3、DU145細胞及激素依賴型LNCAP細胞,通過CCK-8試劑盒檢測,發(fā)現(xiàn)ORI能有效抑制

2、上述三株細胞株增殖,并呈現(xiàn)顯著的劑量和時間依賴性。在ORI作用細胞24 h后,應用DAPI熒光染色,未觀察到DNA斷裂現(xiàn)象;在透射電鏡下觀察,細胞核形態(tài)正常,但胞漿中出現(xiàn)大量由雙層膜包裹的自噬體及自噬前體,自噬體內(nèi)含部分胞質(zhì)、線粒體或高爾基體等細胞器;通過Acridine orange(AO)及Mono-dansylcadervarine(MDC)活細胞染色發(fā)現(xiàn)胞漿中存在大量酸性泡囊細胞器(acid vesicular organell

3、es,AVOs)。在PC-3細胞轉染tfLC3質(zhì)粒后,共聚焦顯微鏡下觀察到OR1誘導LC3II在自噬體膜上募集。Western blot檢測發(fā)現(xiàn)ORI處理導致Lc3I蛋白向LC3II的泛素化修飾。自噬特異性抑制劑3-MA能抑制ORI引起的AVOs形成及LC3I蛋白的泛素化修飾。ORI上調(diào)P21蛋白表達水平,但抑制自噬能完全逆轉P21蛋白水平的增加。在ORI作用48h細胞后,細胞核出現(xiàn)DNA斷裂,染色質(zhì)凝集及細胞表面微絨毛消失,以及自噬體