放創(chuàng)復(fù)合傷大鼠免疫調(diào)節(jié)變化及pHGF促愈機(jī)理的初步研究.pdf

1、第一部分放創(chuàng)復(fù)合傷大鼠免疫調(diào)節(jié)變化及其與創(chuàng)傷愈合的關(guān)系
　　目的:已知輻射可導(dǎo)致免疫功能受損，免疫平衡失調(diào)。然而，目前對(duì)放創(chuàng)復(fù)合傷難愈機(jī)制的研究?jī)H限于創(chuàng)傷愈合過程的研究，而輻射所致機(jī)體免疫調(diào)節(jié)功能損傷對(duì)創(chuàng)傷愈合的影響尚不明確。本部分?jǐn)M研究放創(chuàng)復(fù)合傷免疫調(diào)節(jié)功能的變化及其對(duì)創(chuàng)傷愈合的影響，期望能為放創(chuàng)復(fù)合傷難愈機(jī)制及促愈治療的研究提供參考和借鑒。
　　方法:清潔級(jí)Wistar雌性大鼠66只，體重200±20g，將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為正

2、常對(duì)照組（正常組，Normal）、單純創(chuàng)傷組(單傷組，SW)、創(chuàng)傷+5Gy全身照射組（全身照射組，WTR）和創(chuàng)傷+25Gy局部照射組(局部照射組，WLR)共4組。采用5Gy全身照射及25Gy局部照射合并創(chuàng)傷的兩種大鼠放創(chuàng)復(fù)合傷動(dòng)物模型。于傷照后3d、7d、14d和28d檢測(cè)外周血WBC和LYM數(shù)量;采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)外周血CD4+和CD8+T淋巴細(xì)胞及脾臟Treg和Th17細(xì)胞比例;并用ELISA法檢測(cè)血清IFN-γ和IL-4含量。

3、r>　　結(jié)果:(1)全身照射組和局部照射組傷口愈合均顯著延遲，傷口膠原含量均顯著降低。(2)全身照射組和局部照射組胸腺和脾臟指數(shù)均顯著低于單傷組。(3)傷照后3d和7d單傷組外周血WBC和LYM數(shù)均低于正常組;傷照后3d至14d全身照射組和局部照射組外周血WBC和LYM數(shù)均顯著低于正常組和單傷組。(4)傷照后7d至28d，全身照射組和局部照射組外周血CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞比例均明顯低于正常組;傷照后3d，全身照射組和局部照射組CD

4、4+/CD8+比值均顯著高于正常組和單傷組，但局部照射組低于全身照射組。(5)傷照后，單傷組脾臟Treg、 Th17細(xì)胞比例及其比值均未見明顯變化。傷照后3d和7d，全身照射組脾臟Treg細(xì)胞比例均顯著高于正常組和單傷組，而局部照射組僅在傷照后3d出現(xiàn)顯著增加。傷照后3d至7d，全身照射組和局部照射組脾臟Th17細(xì)胞比例均較正常組和單傷組顯著增加;導(dǎo)致全身照射組和局部照射組Treg/Th17比值均出現(xiàn)明顯降低。(6)傷照后3d和7d，全

5、身照射組和局部照射組血清IFN-γ含量均顯著低于單傷組和正常組。傷照后不同時(shí)間各處理組血清IL-4含量均無顯著變化。傷照后3d和7d，全身照射組和局部照射組血清IFN-γ/IL-4比值均明顯低于正常組和單傷組，即Th1/Th2平衡向Th2型免疫反應(yīng)偏移。
　　結(jié)論:(1)放創(chuàng)復(fù)合傷大鼠傷口愈合顯著延遲。(2)單純皮膚創(chuàng)傷對(duì)機(jī)體免疫調(diào)節(jié)功能的影響不明顯。(3)合并輻射損傷后，CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞比例均顯著降低，而CD4+/C

6、D8+比值顯著升高;Treg、 Th17細(xì)胞比例顯著增加，Treg/Th17平衡向Th17偏移;IFN-γ含量明顯降低，Th1/Th2平衡模式失調(diào)，且合并全身照射時(shí)這些變化更為明顯，致使機(jī)體免疫調(diào)節(jié)功能紊亂和內(nèi)穩(wěn)態(tài)失衡，這是導(dǎo)致放創(chuàng)復(fù)合傷愈合延遲的重要免疫學(xué)機(jī)制。
　　第二部分pHGF促進(jìn)放創(chuàng)復(fù)合傷愈合相關(guān)機(jī)理的初步探討
　　目的:本實(shí)驗(yàn)室前期研究表明，攜帶人肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子的重組質(zhì)粒(pHGF)對(duì)放創(chuàng)復(fù)合傷具有很好的促愈作用

7、，但其促愈機(jī)理尚未完全闡明。本部分?jǐn)M從免疫學(xué)角度探討pHGF促進(jìn)放創(chuàng)復(fù)合傷愈合的機(jī)制，期望能為pHGF的臨床實(shí)驗(yàn)研究提供進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:清潔級(jí)Wistar雌性大鼠66只，體重200±20g，將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為正常對(duì)照組（正常組，Normal），創(chuàng)傷+25Gy局部照射+PBS組(PBS組，PBS)，創(chuàng)傷+25Gy局部照射+金因肽組(金因肽組，JYT)和創(chuàng)傷+25Gy局部照射+pHGF組(pHGF組，pHGF)，共4組。采用

8、25Gy局部照射合并創(chuàng)傷的大鼠放創(chuàng)復(fù)合傷動(dòng)物模型。于傷照后3d、7d、14d和28d檢測(cè)外周血WBC和LYM數(shù)量;并檢測(cè)外周血CD4+和CD8+T細(xì)胞亞群及脾臟Treg和Th17細(xì)胞比例。
　　結(jié)果:(1)傷照后28d，pHGF組傷口已經(jīng)愈合，而PBS組和JYT組尚未完全愈合。(2)與PBS組和JYT組相比，pHGF組創(chuàng)面具有炎性細(xì)胞滲出多、肉芽組織豐富、血管生成及表皮細(xì)胞增生明顯及膠原纖維含量高等特點(diǎn)。(3)傷照后7d和14d，

9、pHGF組外周血WBC和LYM數(shù)均顯著高于PBS組。(4)傷照后3d，與PBS組比較，pHGF組外周血CD8+T淋巴細(xì)胞比例出現(xiàn)明顯增加，導(dǎo)致CD4+/CD8+比值出現(xiàn)顯著降低。(5)傷照后3d和7d，pHGF組脾臟Treg、 Th17細(xì)胞比例較PBS組出現(xiàn)顯著降低，且于傷照后7d脾臟Treg/Th17比值出現(xiàn)顯著增加。
　　結(jié)論:(1) pHGF能明顯促進(jìn)放射復(fù)合創(chuàng)傷傷口的愈合，表現(xiàn)在促進(jìn)傷口區(qū)肉芽組織的生長(zhǎng)、肉芽組織內(nèi)成纖維細(xì)