洛伐他汀聯(lián)合外源性內(nèi)皮祖細(xì)胞修復(fù)家兔股骨頭壞死.pdf

1、研究背景:
　　按國(guó)際骨循環(huán)學(xué)會(huì)(associationresearch circulation osseons,ARCO)定義,骨壞死(osteonecrosis,ON)即是指由于各種原因(包括機(jī)械、生物等)使骨內(nèi)循環(huán)中斷,骨的活性成分死亡及隨后修復(fù)失敗的一系列復(fù)雜病理過程,其累及骨骼以及關(guān)節(jié)系統(tǒng),好發(fā)于負(fù)重關(guān)節(jié),其中以股骨頭壞死最為常見。骨壞死可以在任何年齡、性別發(fā)病,但患者絕大多數(shù)為30～59年齡組,其男女發(fā)病率比約為8:1

2、。研究表明:此類病人在美國(guó)此類病人約有30-60萬,并且每年新增加病人1-2萬,明確診斷的患者中,10％需要行全髖置換術(shù)占10%。在我國(guó),隨著皮質(zhì)類固醇的廣泛應(yīng)用,酗酒嚴(yán)重增加,其引起非創(chuàng)傷性骨壞死發(fā)生也隨之增加?；颊叱霈F(xiàn)骨壞死的一系列癥狀。最終導(dǎo)致患者勞動(dòng)能力散失,具有相當(dāng)高的致殘率。目前對(duì)于早期股骨頭壞死一般行對(duì)癥治療,而晚期則行髖關(guān)節(jié)置換術(shù)。醫(yī)學(xué)界一直在尋求更為有效治療手段。
　　對(duì)于骨壞死的發(fā)病機(jī)制,現(xiàn)在普遍認(rèn)為,微血栓的

3、形成是非創(chuàng)傷性骨壞死骨細(xì)胞死亡和骨結(jié)構(gòu)喪失的主要原因。血管內(nèi)、外的高壓加之脂肪細(xì)胞的增生在微血管阻塞中起到一定作用。非創(chuàng)傷性骨壞死的病因有以下的幾個(gè)假說,如血管內(nèi)凝血學(xué)說、骨內(nèi)高壓、脂肪栓塞學(xué)說、骨質(zhì)疏松學(xué)說、靜脈淤滯學(xué)說、及微血管損傷學(xué)說等,原因最終都可以歸為機(jī)械性原因。血栓栓塞和血管外壓迫阻斷了血管內(nèi)的血流,導(dǎo)致骨組織的缺血,最后出現(xiàn)骨細(xì)胞的壞死。微循環(huán)的血栓形成及血管內(nèi)凝血是引起非創(chuàng)傷性骨壞死的各種病因的共同通路,在很多骨壞死患者

4、的病理標(biāo)本中發(fā)現(xiàn)的微循環(huán)血栓證實(shí)了這個(gè)觀點(diǎn)。
　　股骨頭壞死(Osteonecrosis of the femoral head,ONFH)是指股骨骨小梁、骨髓細(xì)胞的壞死,最終導(dǎo)致髖關(guān)節(jié)功能障礙。皮質(zhì)醇的廣泛應(yīng)用是股骨頭壞死的重要原因之一,然而由于并不清楚其病生理的過程,防治十分困難。皮質(zhì)醇可能通過引起高脂血癥,因此繼而引起股骨頭微血管的脂肪栓塞,最終導(dǎo)致股骨頭壞死。皮質(zhì)醇引起的股骨頭壞死是部分患者接受激素治療的重要并發(fā)癥之一。由

5、于機(jī)械的發(fā)病原因在年輕患者,激素性股骨頭壞死一般均位于承重區(qū)域,因此一旦股骨頭塌陷、髖關(guān)節(jié)將產(chǎn)生毀損性損傷,關(guān)節(jié)功能喪失,后果嚴(yán)重。
　　內(nèi)皮祖細(xì)胞(endothelial progenitor cells,EPCs)又稱為血管前體細(xì)胞,自1997年 Asahara首次詳細(xì)地描述了 EPCs可以向內(nèi)皮細(xì)胞分化并參與血管的更新重塑作用以來,便成為血管更新研究的熱點(diǎn)。周圍血管疾病如肢體缺血、嚴(yán)重的腦和心肌缺血,在缺血組織中植入內(nèi)皮祖細(xì)

6、胞可以證明其可以促使血管生成。最近研究發(fā)現(xiàn),在骨折、骨缺損患者中,局部植入血管內(nèi)皮祖細(xì)胞可以促進(jìn)血管再生,和加速骨再生速度。然而,內(nèi)皮祖細(xì)胞是否可以促進(jìn)股骨頭血管再生,修復(fù)股骨頭骨壞死,對(duì)臨床治療股骨頭壞死有重要意義。
　　生理狀態(tài)下,EPCs主要存在于人體骨髓組織中,外周血中EPCs的數(shù)量?jī)H占血液循環(huán)中單個(gè)核細(xì)胞的0.01%。EPCs的動(dòng)員就是刺激骨髓組織中的EPCs向外周血遷移。EPCs的早期動(dòng)員在骨髓組織的微環(huán)境中進(jìn)行。是由

7、纖維母細(xì)胞、骨原細(xì)胞及內(nèi)皮細(xì)胞等組成的微環(huán)境——“干細(xì)胞龕”。其決定著祖細(xì)胞的動(dòng)員。在動(dòng)員因素方面,內(nèi)源性組織缺血、缺血、燒傷、局部的血管損傷、創(chuàng)傷等均可刺激EPCs從骨髓中動(dòng)員出來。體內(nèi)的干細(xì)胞、內(nèi)皮祖細(xì)胞的動(dòng)員、轉(zhuǎn)移到受損部位,并且修復(fù)缺損組織,是體內(nèi)組織修復(fù)的重要方式之一。但外源性的干細(xì)胞、內(nèi)皮祖細(xì)胞在臨床應(yīng)用中受到了倫理、細(xì)胞活性、細(xì)胞污染及細(xì)胞存活率等多個(gè)方面不可控因素的限制,于是如何動(dòng)員自體細(xì)胞向需要修復(fù)的部位遷移就成為目前

8、研究機(jī)體損傷修復(fù)的熱點(diǎn)。有文獻(xiàn)報(bào)道,局部植入他汀類藥物是可以促使干細(xì)胞向骨折部位遷移,修復(fù)骨缺損因此,我們的工作可以試圖從建立的家兔股骨頭壞死模型中使用外源性內(nèi)皮祖細(xì)胞,及洛伐他汀的干預(yù)鑒定其修復(fù)的效果。
　　本課題的主要研究?jī)?nèi)容:(1)建立家兔股骨頭壞死模型;(2)外源性內(nèi)皮祖細(xì)胞及洛伐他汀干預(yù)(3)修復(fù)結(jié)果的鑒定。
　　目的:
　　探討洛伐他汀聯(lián)合外源性內(nèi)皮祖細(xì)胞修復(fù)家兔股骨頭壞死的可能性。
　　方法:

9、>　　(1)建立激素誘導(dǎo)的家兔股骨頭壞死模型4組,實(shí)驗(yàn)組3組,對(duì)照組1組,每組各9只;
　　(2)分離培養(yǎng)內(nèi)皮祖細(xì)胞;
　　(3)3組實(shí)驗(yàn)組分別給予耳緣靜脈注射內(nèi)皮祖細(xì)胞、灌服洛伐他汀、耳緣靜脈注射內(nèi)皮祖細(xì)胞合并灌服洛伐他汀,對(duì)照組不做處理。于注射后4、8周觀察各組家兔的一般情況并行X線、組織病理學(xué)觀察骨質(zhì)修復(fù)的效果。
　　結(jié)果:
　　單純注射外源內(nèi)皮祖細(xì)胞組、單純灌服洛伐他汀組骨壞死組織均出現(xiàn)修復(fù),但其修復(fù)效果