小鼠模型感染大片形吸蟲(chóng)研究平臺(tái)初探.pdf

1、片形吸蟲(chóng)病主要侵害宿主的肝膽系統(tǒng)，且該病早期診斷困難，即便后期用藥驅(qū)除了蟲(chóng)體，對(duì)肝臟造成的損傷也較難修復(fù)。因此探明大片形吸蟲(chóng)感染后肝臟損傷的相關(guān)機(jī)制，對(duì)豐富大片形吸蟲(chóng)和宿主之間的相互作用機(jī)制及感染宿主的肝臟治療和康復(fù)具有極其重要的意義。本研究?jī)?nèi)容包括:大片形吸蟲(chóng)囊蚴實(shí)驗(yàn)室繁育方案的優(yōu)化完善，大片形吸蟲(chóng)-昆明小鼠感染模型的建立以及感染昆明小鼠肝臟病理學(xué)的初步研究;這些研究旨在為大片形吸蟲(chóng)肝臟免疫和組織損傷修復(fù)等下游研究夯實(shí)基礎(chǔ)。
　

2、　首先完善優(yōu)化實(shí)驗(yàn)室人工培養(yǎng)大片形吸蟲(chóng)囊蚴體系，并對(duì)大片形吸蟲(chóng)在中間宿主體內(nèi)的發(fā)育特點(diǎn)進(jìn)行觀察。分別以1，3，7條毛蚴感染2～3mm，5～7mm兩種體型大小的小土蝸螺，在室溫26℃時(shí)，感染后10～17天可見(jiàn)母雷蚴，28天可見(jiàn)子雷蚴體內(nèi)充滿尾蚴，30～33天可見(jiàn)尾蚴釋放并結(jié)囊為囊蚴。對(duì)比分析不同大小的螺感染不同數(shù)量的毛蚴最后產(chǎn)囊蚴率結(jié)果，得出最佳培養(yǎng)方案與肝片形吸蟲(chóng)囊蚴培養(yǎng)不同，大片形吸蟲(chóng)囊蚴培養(yǎng)選用3～5mm大小的螺，每螺感染3條毛蚴時(shí)

3、產(chǎn)囊蚴量最多。
　　以5、15、30和50個(gè)囊蚴經(jīng)口感染小鼠，于不同時(shí)期分別剖檢以觀察蟲(chóng)體分布、回收、發(fā)育情況，以及肝臟的病理變化。結(jié)果顯示:感染后5天內(nèi)便可在肝實(shí)質(zhì)探查到蟲(chóng)體，35～42天內(nèi)童蟲(chóng)完成從肝實(shí)質(zhì)向膽管移行，但各感染組均未發(fā)現(xiàn)成蟲(chóng);大片形吸蟲(chóng)在昆明小鼠體內(nèi)異位寄生現(xiàn)象發(fā)生頻率較高，肺部、口腔、膈肌、前肢皮下等部位均可發(fā)現(xiàn)蟲(chóng)體;受感染昆明小鼠肝臟可見(jiàn)彌散出血、化膿、脂變、纖維化、壞死、硬變等明顯肉眼病理變化，病變程度隨感

4、染強(qiáng)度的增加而加重。表明大片形吸蟲(chóng)-昆明小鼠模型適宜用于童蟲(chóng)期的研究，15個(gè)囊蚴的感染強(qiáng)度是動(dòng)態(tài)觀察昆明小鼠宿主狀態(tài)及相關(guān)研究的適宜感染劑量;小鼠為大片形吸蟲(chóng)的非適宜宿主，不宜作為研究反芻動(dòng)物（適宜宿主）感染大片形吸蟲(chóng)動(dòng)物模型。
　　觀察人工感染大片形吸蟲(chóng)小鼠的肝臟組織學(xué)病理變化顯示:感染后7天，肝臟肉眼可見(jiàn)輕微損傷，HE染色可見(jiàn)肝細(xì)胞排列開(kāi)始紊亂;感染后21～42天，肝臟損失逐漸加重，顯微鏡下可觀察到肝細(xì)胞壞死、結(jié)締組織增生、炎

5、性細(xì)胞的增生浸潤(rùn)等典型的肝組織病理學(xué)改變。檢測(cè)感染大片形吸蟲(chóng)的小鼠血清中堿性磷酸酶(ALP)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLOB)及白球比(A/G)的變化，顯示AST在感染后第3天開(kāi)始升高，21～56天顯著升高(P＜0.01)，49天達(dá)峰值;ALT于感染后14天開(kāi)始升高，21～35天開(kāi)始顯著升高(P＜0.01)，49天達(dá)峰值;ALP呈現(xiàn)感染后14～21天升高，35～49天下降，