水產(chǎn)品中氨基糖苷類(lèi)藥物殘留檢測(cè)的液-質(zhì)聯(lián)用分析法研究.pdf

1、氨基糖苷類(lèi)抗生素是一類(lèi)含有兩個(gè)或多個(gè)氨基糖基團(tuán)并通過(guò)糖苷與氨基環(huán)多醇鍵合而成的一類(lèi)抗生素的總稱(chēng)。由于環(huán)多醇的不同而分為多個(gè)類(lèi)別，其中較為重要的是環(huán)多醇為鏈霉胍的鏈霉素和雙氫鏈霉素，環(huán)多醇為脫氧鏈霉胺的慶大霉素、卡那霉素和新霉素。氨基糖苷類(lèi)藥物通過(guò)阻斷細(xì)菌核糖體合成，達(dá)到破壞細(xì)菌細(xì)胞膜的合成和殺菌的目的，被廣泛用于動(dòng)物源性食品生產(chǎn)過(guò)程中的疾病預(yù)防和控制，由此產(chǎn)生的藥物殘留帶來(lái)了一系列食品安全問(wèn)題，引起了人們的廣泛關(guān)注。為了保證食品安全，保

2、護(hù)人們的身體健康，對(duì)獸藥殘留的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)水平要求越來(lái)越高，因此準(zhǔn)確檢測(cè)藥物殘留顯得尤其重要。 目前對(duì)氨基糖苷類(lèi)獸藥殘留檢測(cè)的方法主要有微生物法、免疫分析法、儀器分析法，在儀器分析法中液相色譜法應(yīng)用較多?，F(xiàn)有方法能檢測(cè)的樣品基質(zhì)多為蜂產(chǎn)品和豬肉，對(duì)其它基質(zhì)樣品研究的少；且大多只能檢測(cè)樣品中一種或幾種氨基糖苷類(lèi)藥物殘留，缺乏復(fù)雜基質(zhì)條件下氨基糖苷類(lèi)藥物殘留的有效檢測(cè)方法；檢測(cè)步驟復(fù)雜、檢測(cè)效率較低，因此很難在實(shí)際應(yīng)用中發(fā)揮作用。LC

3、—MS/MS法具有抗背景干擾和檢測(cè)能力強(qiáng)、靈敏、準(zhǔn)確、檢測(cè)信息豐富的優(yōu)點(diǎn)，對(duì)殘留物成分確證最為有效。本文采用LC—MS/MS法，建立了水產(chǎn)品中氨基糖苷類(lèi)藥物殘留檢測(cè)方法，取得了如下的主要研究成果： 1．獲得了水產(chǎn)品樣品中氨基糖苷類(lèi)藥物的最佳提取條件 在水產(chǎn)品樣品提取中，考察了高氯酸、三氯乙酸、鎢酸鈉等不同蛋白質(zhì)沉淀劑的提取效果；同時(shí)比較了不同濃度三氯乙酸的提取效率，發(fā)現(xiàn)5％三氯乙酸的提取效果最好；在選擇提取方式時(shí)，主要考

4、察了超聲波破碎、機(jī)械勻漿提取對(duì)提取效率的影響。 2．獲得了提取液的最佳凈化條件 比較了不同固相萃取柱(Sep—Pak C18、HR—xSPE、Oasis MCX和Oasis SCX等)的凈化效果，通過(guò)添加七氟丁酸作離子對(duì)試劑，改變提取溶液pH值，得到10種氨基糖苷類(lèi)藥物在固相萃取柱上的保留條件，從而實(shí)現(xiàn)目標(biāo)物與雜質(zhì)的分離。凈化條件為：HR—xSPE柱，活化時(shí)加入七氟丁酸，調(diào)節(jié)提后取溶液pH至4～5，洗脫溶劑為甲醇和氨水甲

5、醇。 3．獲得了氨基糖苷類(lèi)藥物的檢測(cè)條件 試驗(yàn)了不同的色譜柱、流動(dòng)相的組成和柱溫等色譜參數(shù)和質(zhì)譜參數(shù)，得到檢測(cè)條件為：乙腈-100 mmol/L七氟丁酸(80：20，v/v/)作流動(dòng)相梯度洗脫，流速：0.2mL/min，進(jìn)樣量：10μL，分析物在電噴霧正離子條件下，采用多反應(yīng)離子監(jiān)測(cè)模式，用外標(biāo)法定量。 4．建立了水產(chǎn)品中氨基糖苷類(lèi)藥物殘留的檢測(cè)方法 確立了標(biāo)準(zhǔn)曲線和線性范圍、檢測(cè)限、回收率和精密度等方法

6、學(xué)參數(shù)。標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍：50ng/mL～1000ng/mL，對(duì)10種氨基糖苷類(lèi)藥物的檢出限為20ng/g～50ng/g。以50、100和200ng/g的濃度水平添加時(shí)，魚(yú)肌肉組織中10種藥物的回收率為66.5％～108.0％，RSD為2.40％～18.8％；蝦組織中10種藥物的添加回收率為74.9％～99.1％，RSD為3.1％～12.4％。檢測(cè)10種氨基糖苷藥物，日內(nèi)重復(fù)實(shí)驗(yàn)的RSD為1.2％～8.4％，日間重復(fù)實(shí)驗(yàn)的RSD為2.