HPL基因的克隆及對生菜和草莓遺傳轉(zhuǎn)化的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、脂氫過氧化物裂解酶（hydroperoxide lyase，HPL）是脂氧化途徑中脂氧合酶（lipoxygenase，LOX）下游反應(yīng)的一個(gè)關(guān)鍵性酶，其催化生成的短鏈揮發(fā)性醛及相應(yīng)的醇與植物抗病蟲、抗傷害、貯藏、老化等生理進(jìn)程有關(guān)，同時(shí)也是植物特異性氣味的主要成分之一，被廣泛用于食品和香水的添加劑，有較高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。因此，通過生物技術(shù)手段提高果蔬香氣，目前已成為改善果蔬品質(zhì)的重要手段。
　　本研究通過構(gòu)建超表達(dá)載體pCAMBIA2

2、300-35S-HPL-Tnos和組織特異性表達(dá)載體pCAMBIA2300-RJ39-HPL-Tnos，并將其分別轉(zhuǎn)入生菜和草莓中。主要研究工作如下：
　　1、提取枸橘（Ponarus trifoliata）總RNA，逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。根據(jù)NCBI上已登錄的HPL基因序列設(shè)計(jì)引物，克隆獲得HPL基因片段。測序結(jié)果顯示：所克隆的基因序列與金柑瑪格麗塔的同源性為99.13％，與柑橘克萊門的同源性為99%，與甜橙的同源性為98.8%。<

3、br>　　2、根據(jù)RJ39基因序列，設(shè)計(jì)含Hind III和Sma I酶切位點(diǎn)的引物，以質(zhì)粒pCAMBIA3300-RJ39-RS-Tnos為模板，采用PCR方法獲得果實(shí)特異性啟動(dòng)子RJ39。
　　3、構(gòu)建植物超表達(dá)載體pCAMBIA2300-35S-HPL-Tnos和組織特異性表達(dá)載體pCAMBIA2300-RJ39-HPL-Tnos，通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法分別轉(zhuǎn)化生菜和草莓。
　　4、通過PCR和Southern雜交鑒定HPL

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