Wistar大鼠超排及胚胎冷凍研究.pdf

1、本研究采用10 IU/只、20 IU/只和30 IU/只3種劑量的孕馬血清促性腺激素－人絨毛膜促性腺激素(PMSG－HCG)對(duì)8～9周齡的Wistar大鼠進(jìn)行超排處理，收集不同發(fā)育時(shí)期的胚胎，以探討Wistar大鼠不同發(fā)育階段胚胎所需超排試劑的最佳劑量以及采集不同發(fā)育期胚胎的方法；收集的Wistar大鼠2－細(xì)胞期胚胎和桑葚胚，利用凍存管法，用不同冷凍劑組合(DAP213、SDP0323)進(jìn)行玻璃化冷凍，比較其冷凍復(fù)蘇后的胚胎復(fù)蘇率、移植

2、產(chǎn)仔率，篩選新的胚胎凍存液，用于建立大鼠胚胎冷凍庫(kù)。
　　 結(jié)果表明：(1)將8～9周齡的wistar雌鼠60只隨機(jī)分為三組，分別用PMSG和HCG以不同的處理劑量(10IU，20IU，30IU)進(jìn)行超排處理，注射HCG的當(dāng)日與雄性Wistar大鼠1:1合籠、交配，次日早檢查陰栓，確認(rèn)受孕。1.5d采集2-細(xì)胞期胚胎，每只平均獲得胚胎數(shù)分別為(12.1±4.6)、(23.1±10.2)和(24.9±8.2)枚，其中激素劑量為30

3、 IU/只時(shí)超排效果最好。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)t-檢驗(yàn)分析，當(dāng)分別注射20 IU/只、30 IU/只劑量PMSG和HCG時(shí)，均與10IU劑量有顯著性差異(P<0.01)；3.5d采集桑葚期胚胎，每只平均獲得胚胎數(shù)分別為(10.3±5)、(23.7±17.2)和(17.2±5.9)枚，注射20 IU/只劑量的PMSG和HCG時(shí)，所獲取的桑葚胚(23.7.±17.2)明顯高于10 IU/只劑量組(10.3±5)，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)t－檢驗(yàn)分析，兩者之間有顯著性差

4、異(P<0.05)。(2)利用冷凍管方法，冷凍Wistar大鼠2－細(xì)胞期胚胎，DAP213凍存液凍存87枚，胚胎復(fù)蘇后形態(tài)正常45枚(51.7％)，移植43枚胚胎，產(chǎn)仔15只(34.9％)；SDP0323凍存液凍存81枚，胚胎復(fù)蘇后形態(tài)正常56枚(69.1％)，移植56枚胚胎，產(chǎn)仔23只(41.1％)；SDP0323凍存液冷凍大鼠2－細(xì)胞期胚胎的平均復(fù)蘇率和平均產(chǎn)仔數(shù)均比DAP213凍存液組高；但兩種凍存液的胚胎冷凍復(fù)蘇率和產(chǎn)仔率無統(tǒng)計(jì)

5、學(xué)差異(P>0.05)。同樣方法冷凍Wistar大鼠桑葚胚，DAP213凍存液凍存256枚胚胎復(fù)蘇后形態(tài)正常176枚(68.8％)，移植174枚胚胎，產(chǎn)仔32只(19.6％)；SDP0323凍存液凍存214枚，胚胎復(fù)蘇后形態(tài)正常172枚(80.4％)，移植169枚胚胎，產(chǎn)仔32只(21％)。SDP0323凍存液冷凍大鼠桑葚胚的平均復(fù)蘇率和平均產(chǎn)仔數(shù)均比DAP213凍存液組高；但兩種凍存液的胚胎冷凍復(fù)蘇率和產(chǎn)仔率無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05