CUL4B在非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)中的作用研究.pdf

1、肺癌是機(jī)體在各種致瘤因素作用下，支氣管上皮細(xì)胞異常增生形成的新生物，目前已成為致死率最高的一類(lèi)惡性腫瘤。在肺癌的眾多組織類(lèi)型中，非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)發(fā)病率最高。對(duì)于ⅠA期NSCLC患者，其五年生存率可高達(dá)80％，但由于早期癥狀不明顯，大多數(shù)患者就診時(shí)已并發(fā)轉(zhuǎn)移，其五年生存率下降到25％（Ⅲ期）甚至1％（Ⅳ期），嚴(yán)重影響患者生存質(zhì)量。已經(jīng)證實(shí)多個(gè)原癌和抑癌基因的表達(dá)變化與肺癌的發(fā)生密切相關(guān)，但對(duì)NSCLC發(fā)生的具體分子機(jī)制仍有許多空

2、白。因此，進(jìn)一步探索NSCLC發(fā)病機(jī)制，實(shí)現(xiàn)早期診斷、早期治療、提高患者生存率成為當(dāng)務(wù)之急。
　　泛素化修飾是機(jī)體實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)胞周期、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、損傷修復(fù)等生理活動(dòng)調(diào)控的關(guān)鍵機(jī)制之一。CUL4B屬于Cullin基因家族，該家族成員是泛素E3連接酶CULLIN-RING(CRL)的重要組成部分。CRLs是目前已知的最大一類(lèi)泛素連接酶。多項(xiàng)研究表明，Cullin基因家族成員與腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)。例如伴有CUL1過(guò)表達(dá)的胃癌患者普遍預(yù)后不良，

3、CUL3功能改變與肺癌、前列腺癌的發(fā)生相關(guān)，由COP9信號(hào)小體與cullin形成的CSN-CRL的功能缺陷與泌尿系腫瘤的發(fā)生相關(guān)。此外，CUL4A異常累積與乳腺癌、肺癌、肝癌及卵巢癌的發(fā)生有關(guān)。隨著對(duì)CUL4-RINGligase的研究的不斷深入，其泛素化底物不斷被發(fā)現(xiàn)，這其中就包括與腫瘤發(fā)生相關(guān)的TSC2、RhoGTPase激活蛋白、c-Jun等。本實(shí)驗(yàn)室之前對(duì)CUL4B功能的研究已證實(shí)，CUL4B既可以通過(guò)microRNAs途徑在轉(zhuǎn)

4、錄后水平調(diào)控細(xì)胞周期蛋白CDK2的表達(dá)，又可以招募PRC2在表觀遺傳學(xué)水平調(diào)控腫瘤相關(guān)基因表達(dá)。而CDK2與PRC2在包括NSCLC在內(nèi)的多種腫瘤中均表達(dá)上調(diào)，因此，我們推測(cè)CUL4B可能在NSCLC的發(fā)生過(guò)程中也發(fā)揮重要作用。目前已有研究表明CUL4B在食管癌、結(jié)腸癌、小鼠盲腸癌中分別以原癌基因和抑癌基因的身份發(fā)揮作用，但CUL4B在NSCLC發(fā)生過(guò)程中的具體作用及其機(jī)制未見(jiàn)報(bào)道。
　　為了探究CUL4B與NSCLC發(fā)生的關(guān)系，

5、本課題通過(guò)免疫組織化學(xué)染色證實(shí)CUL4B在NSCLC癌組織中的表達(dá)水平明顯上調(diào)。然后通過(guò)MTT、克隆形成實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)穩(wěn)定干擾肺癌細(xì)胞株H1299中CUL4B的表達(dá)后，細(xì)胞增殖速度減慢。裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)也證實(shí)，與對(duì)照細(xì)胞相比，H1299-shCUL4B細(xì)胞成瘤率降低，腫瘤生長(zhǎng)速度減慢、體積縮小、重量減輕。此外藥物處理實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)CUL4B低表達(dá)后細(xì)胞對(duì)化療藥物ADR、ETO更加敏感。
　　總而言之，我們通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)，CUL4B在非小細(xì)胞肺癌發(fā)