胃印戒細(xì)胞癌胃、腸表型分型及其與K-ras基因突變和預(yù)后的相關(guān)性研究.pdf

1、目的:
　　1)了解胃印戒細(xì)胞癌黏液分泌性狀、數(shù)量和分布,探討?zhàn)ひ寒愘|(zhì)性表達(dá)的機制及其生物學(xué)意義。
　　2)探討胃、腸表型分型及其與K-ras基因突變和預(yù)后的相關(guān)性,評價K-ras基因突變作為胃印戒細(xì)胞癌分子靶向治療靶點的可行性,為胃印戒細(xì)胞癌患者的治療、預(yù)后評價提供有力的理論依據(jù)。
　　方法:
　　1)電話隨訪2000年～2008年在我院行胃癌根治術(shù)的胃印戒細(xì)胞癌患者163例,調(diào)查患者的生存狀況,了解死亡患者的

2、死亡時間和死亡原因。
　　2)對163例癌組織和30例正常胃黏膜組織行黏液組化染色,檢測兩組中黏液表型表達(dá)狀況;同時結(jié)合免疫組化Envision法檢測胃黏膜上皮免疫表型標(biāo)記MUC1、MUC5AC、MUC6和腸黏膜上皮免疫表型標(biāo)記MUC2、CDX2的表達(dá)水平,并根據(jù)腫瘤細(xì)胞胃、腸黏膜上皮免疫表型標(biāo)記物表達(dá)水平的差異,將胃印戒細(xì)胞癌分為三種類型:胃型印戒細(xì)胞癌(只表達(dá)胃免疫表型標(biāo)記),腸型印戒細(xì)胞癌(只表達(dá)腸免疫表型標(biāo)記),混合型印戒

3、細(xì)胞癌(同時表達(dá)胃免疫表型和腸免疫表型標(biāo)記)。
　　3)抽提腫瘤組織基因組DNA,PCR-DNA直接測序方法檢測163例癌組織中K-ras基因第12、13和61密碼子突變狀況。
　　結(jié)果:
　　1)163例患者有143例獲得隨訪資料,隨訪率87.7％。62例患者生存,81例患者死亡。
　　2)癌組織形態(tài)學(xué)觀察查見Ⅰ型印戒細(xì)胞癌137例,Ⅲ型印戒細(xì)胞癌26例,無其他三種類型發(fā)現(xiàn)。
　　3)163例癌組織和30

4、例正常胃黏膜組織內(nèi)中性黏液、唾液酸黏液和硫酸黏液檢出率分別為69.9％(114/163)、42.3％(69/163)、19％(31/163)和100％(30/30)、0％(0/30)、0％(0/30);兩組中MUC1、MUC5AC、MUC6、MUC2、CDX2的陽性表達(dá)率分別為20.9％(34/163)、73.6％(120/163)、28.8％(47/163)、46.6％(76/163)、39.3％(64/163)和50％(15/30)

5、、80％(24/30)、60％(18/30)、0％(0/30)、0％(0/30)。
　　4)中性黏液、唾液酸黏液和硫酸黏液檢出率兩組間均有顯著性差異(均P＜0.05);MUC1、MUC6、MUC2和CDX2的陽性表達(dá)率兩組間均有顯著性差異(均P＜0.05);MUC5AC的陽性表達(dá)率兩組間無顯著性差異(P＞0.05)。
　　5)中性黏液更多見于腫塊≤5.0cm病例,唾液酸黏液更多見于腫塊＞5.0cm患者;黏膜內(nèi)癌中性黏液檢出率

6、顯著高于黏膜下層浸潤癌(P＜0.05),相反,黏膜內(nèi)癌唾液酸黏液和硫酸黏液檢出率顯著低于黏膜下層浸潤癌(均P＜0.05);淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中性黏液檢出率顯著低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(P＜0.05),而唾液酸黏液檢出率顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(P＜0.05);(Ⅰ+Ⅱ)期癌組織內(nèi)中性黏液檢出率明顯高于(Ⅲ+Ⅳ)期(P＜0.05),而唾液酸黏液檢出率則顯著低于(Ⅲ+Ⅳ)期(P＜0.05)。
　　6)胃、腸表型標(biāo)記表達(dá)水平與印戒細(xì)胞癌形態(tài)學(xué)分型無相

7、關(guān)性(P＞0.05)。
　　7)MUC2陽性表達(dá)與腫瘤浸潤深度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)性(P=0.001和P=0.002);CDX2陽性表達(dá)與腫瘤大小、浸潤深度以及腫瘤TNM分期呈正相關(guān)(P=0.004和P=0.001);MUC5AC陽性表達(dá)與腫瘤浸潤深度呈負(fù)相關(guān)(P=0.001)。
　　8)根據(jù)胃、腸上皮免疫表型表達(dá)差異,查見胃型印戒細(xì)胞癌、混合型印戒細(xì)胞癌、腸型印戒細(xì)胞癌分別為63例(38.6％)、71例(43.5％)、29

8、例(17.9％)。
　　9)腸型印戒細(xì)胞癌更多見于腫塊＞5.0cm、有黏膜下層浸潤、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和(Ⅲ+Ⅳ)期的病例中(均P＜0.01)。
　　10)163例癌組織中,K-ras基因突變率為12.27％(20/163),所有突變位點均位于12密碼子,突變類型包括:GGT→GTT(8例),GGT→GAT(10例),GGT→AGT(1例),GGT→TGT(1例)。13和61密碼子未檢出突變。
　　11)K-ras基因突變更多

9、見于MUC5AC陰性、MUC6陰性以及腸型印戒細(xì)胞癌中。
　　12)生存分析顯示,MUC2陽性患者中位生存期明顯低于MUC2陰性患者(P＜0.05);非胃型(腸型和混合型)印戒細(xì)胞癌患者中位生存期明顯低于胃型印戒細(xì)胞癌(P＜0.05)。
　　13)單因素分析顯示腫瘤浸潤深度和MUC2陽性表達(dá)與預(yù)后相關(guān)(均P＜0.05),腫瘤大小、患者年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等因素與預(yù)后無相關(guān)性。多因素分析顯示腫瘤浸潤深度和MUC2陽性表達(dá)可以作為獨

10、立的預(yù)后因素(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1)胃、腸表型標(biāo)記及其分型與胃印戒細(xì)胞癌的生物學(xué)行為和預(yù)后密切相關(guān),腸型胃印戒細(xì)胞癌臨床生物學(xué)行為和預(yù)后均較胃型印戒細(xì)胞癌差,該分型彌補了傳統(tǒng)形態(tài)學(xué)分型的不足。建立統(tǒng)一的、科學(xué)合理的免疫表型分型標(biāo)準(zhǔn),對印戒細(xì)胞癌有重要價值。
　　2)本研究首次發(fā)現(xiàn)在胃印戒細(xì)胞癌中,K-ras基因突變率為12.27％,12密碼子是突變熱點。
　　3)K-ras基因突變更多見于腸型病例