Q開關(guān)激光構(gòu)建白癜風動物模型及骨髓間充質(zhì)干細胞的誘導分化.pdf

1、目的：研究Q開關(guān)激光對豚鼠皮膚黑素細胞的影響，構(gòu)建白癜風動物模型；建立人骨髓間充質(zhì)干細胞(MSCs)的分離培養(yǎng)方法，體外誘導分化為脂肪細胞、成骨細胞，探討誘導分化為黑素細胞的體內(nèi)外微環(huán)境。
　　 方法：1、Q開關(guān)YAG激光照射豚鼠的黑色皮膚，間隔10天重復照射1次，共3次。通過觀察皮膚顏色變化、HE染色和HMB5免疫組化染色后，觀察黑素細胞的變化。
　　 2、采用全骨髓貼壁法提取MSCs，進行體外擴增與純化，通過細胞形態(tài)

2、，以及定向誘導MSCs向脂肪細胞、成骨細胞分化，從而證明培養(yǎng)的細胞是具有多向分化潛能的MSCs。
　　 結(jié)果：
　　 1、Q開光激光構(gòu)建白癜風動物模型：(1)Q開關(guān)YAG激光第1次照射后10d，觀察照射區(qū)域黑色皮膚呈白色，可見小黑點，長出的毛發(fā)幾乎為白色，極少量黑色。照射區(qū)域HE染色及HMB5免疫組化染色后，鏡下觀察基底層偶見黑素細胞。(2)第2次激光后10d和第3次激光后10d(模型建成期)，照射區(qū)域皮膚呈白色，長出的

3、毛發(fā)均為白色。照射區(qū)域HE染色及HMB45免疫組化染色后，鏡下基底層未見黑素細胞。(3)模型建成后8周，激光照射區(qū)域的皮膚及長出的毛發(fā)仍呈白色。HE染色及HMB45免疫組化染色后，鏡下觀察基底層未見黑素細胞。
　　 2、人骨髓MSCs的培養(yǎng)與鑒定：(1)人骨髓MSCs的形態(tài)學觀察：首次換液后，可見散在橢圓形、梭形、多角形細胞，分布不均勻。隨著換液次數(shù)的增加，未貼壁的雜細胞逐漸被洗掉，剩下的貼壁緊密的細胞的形態(tài)逐漸變成長梭形，可見

4、少量細胞克隆形成，中心細胞分布較密，外周細胞呈放射狀向外分布。當細胞傳代后，細胞分布均一，呈長梭形，細胞數(shù)增加越來越快。(2)人骨髓MSCs向成骨細胞誘導分化：經(jīng)Von Kossa染色后，可見棕褐色的鈣結(jié)節(jié)。(3)人骨髓MSCs向脂肪細胞誘導：經(jīng)油紅染色后，可見胞漿中橘紅色的脂滴。
　　 結(jié)論：
　　 1、運用Q開關(guān)YAG激光可以破壞豚鼠皮膚的黑素細胞，并且可以維持至少8周的穩(wěn)定性，從而構(gòu)建短期穩(wěn)定的白癜風動物模型，為白