添加甘藍(lán)3號染色體片段的AT3-11等大白菜易位系篩選及鑒定.pdf

1、為創(chuàng)建大白菜—結(jié)球甘藍(lán)異源易位系，本研究以大白菜—結(jié)球甘藍(lán)3號單體異附加系(AA+C3)為試材，用60Co-γ射線對其植株進(jìn)行輻射，對輻射前后植株進(jìn)行自交和游離小孢子培養(yǎng)，并對獲得的自交后代和小孢子植株進(jìn)行細(xì)胞學(xué)和InDel標(biāo)記鑒定，從54個(gè)小孢子植株及46個(gè)自交后代中初步篩選出8個(gè)添加結(jié)球甘藍(lán)3號染色體片段的大白菜—結(jié)球甘藍(lán)易位系，為大白菜的遺傳與育種提供了基礎(chǔ)研究材料。主要研究結(jié)果如下:
　　1.對大白菜—結(jié)球甘藍(lán)3號單體異附

2、加系（AA+C3）進(jìn)行游離小孢子培養(yǎng)，利用結(jié)球甘藍(lán)C02連鎖群（位于結(jié)球甘藍(lán)3號染色體）相對于大白菜的特異InDel標(biāo)記對獲得的小孢子植株進(jìn)行鑒定，從17個(gè)小孢子植株中篩選出1個(gè)具有結(jié)球甘藍(lán)特異條帶的植株。花粉母細(xì)胞減數(shù)分裂觀察結(jié)果顯示，該植株染色體數(shù)為20條，為添加結(jié)球甘藍(lán)3號染色體片段的大白菜—結(jié)球甘藍(lán)易位系，命名為AT3-11。通過對InDel標(biāo)記的加密設(shè)計(jì)，明確了該植株中外源甘藍(lán)片段的大小為1.03 Mb。利用大白菜A基因組10

3、個(gè)連鎖群上均勻分布的100個(gè)InDel標(biāo)記對其進(jìn)行分子鑒定，初步確定了該易位系中甘藍(lán)染色體片段位于大白菜5號染色體上。
　　2.分別利用30Gy、45Gy和60Gy的60Co-γ射線對大白菜—結(jié)球甘藍(lán)3號單體異附加系進(jìn)行植株輻射，并對輻射后的植株進(jìn)行游離小孢子培養(yǎng)，利用結(jié)球甘藍(lán)C02連鎖群相對于大白菜的特異InDel標(biāo)記對獲得的小孢子植株進(jìn)行鑒定，從37個(gè)小孢子植株中篩選出8個(gè)具有結(jié)球甘藍(lán)C02連鎖群特異條帶的植株。其中，1個(gè)來自

4、30Gy輻射的植株，5個(gè)來自45Gy輻射的植株，2個(gè)來自60Gy輻射的植株。對8個(gè)具有甘藍(lán)特異條帶的植株進(jìn)行減數(shù)分裂觀察，結(jié)果顯示這些植株中有4株染色體數(shù)為20條，初步確定這4株為添加結(jié)球甘藍(lán)3號染色體片段的大白菜—結(jié)球甘藍(lán)易位系，命名為AT3-24、AT3-45、AT3-47和AT3-54。
　　3.用30Gy、45Gy和60Gy的60Co-γ射線對大白菜—結(jié)球甘藍(lán)3號單體異附加系進(jìn)行花粉輻射，并自交留種，對獲得的M1植株進(jìn)行I

5、nDel標(biāo)記鑒定，從46個(gè)M1植株中篩選出5個(gè)具有結(jié)球甘藍(lán)C02連鎖群特異條帶的植株，通過對其進(jìn)行減數(shù)分裂觀察，明確了其中3個(gè)植株的染色體數(shù)為20條，初步確定其為大白菜—結(jié)球甘藍(lán)異源易位系，命名為AT3-4、AT3-23和AT3-39。對AT3-39后代進(jìn)行InDel標(biāo)記鑒定，22個(gè)M2植株中有17棵的擴(kuò)增產(chǎn)物與結(jié)球甘藍(lán)親本相同，部分植株中無結(jié)球甘藍(lán)特異標(biāo)記，表明AT3-39為雜合易位系植株。
　　4.以二倍體大白菜親本‘85-1