B細(xì)胞聯(lián)合CIK細(xì)胞治療腫瘤的體外研究.pdf

1、研究背景:生物免疫治療已經(jīng)成為繼手術(shù)、化療、放療后的第四大抗腫瘤治療方法。人們嘗試使用多種免疫細(xì)胞(DC、CIK、CTL、NK等)過繼轉(zhuǎn)移治療腫瘤,盡管在許多臨床試驗(yàn)中觀察到抗腫瘤免疫應(yīng)答,但臨床總體治療效果仍不盡人意。有必要從臨床角度深入了解免疫系統(tǒng)中各成分的相互作用及聯(lián)合治療的效果。我們注意到,迄今很少有人研究B細(xì)胞在腫瘤免疫治療方面的作用,其作為特異性免疫系統(tǒng)的重要成分,應(yīng)予以充分的重視。
　　 目的:建立分離、純化及擴(kuò)增

2、人外周血B細(xì)胞的方法,觀察體外B細(xì)胞聯(lián)合CIK細(xì)胞治療腫瘤的效果。
　　 方法:1)抽取健康志愿者外周血,采用梯度密度離心法分離PBMC;2)用CD19+磁珠從PBMC中分離并純化B細(xì)胞；3)以CD40抗體和LPS啟動后,分別以不同細(xì)胞因子及組合擴(kuò)增B細(xì)胞:①IL-2、②IL-4、③IL-2+IL-4、④IL-2+IL-4+BAFF;4)使用流式細(xì)胞術(shù)檢測體外擴(kuò)增后B細(xì)胞的CD80表型:5)采用ELISA法檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清液中I

3、gG和IL-10的分泌情況；6)以BGC-823胃癌細(xì)胞系為靶細(xì)胞,分別以B細(xì)胞聯(lián)合CIK細(xì)胞和DC聯(lián)合CIK細(xì)胞為效應(yīng)細(xì)胞,用LDH釋放法比較兩組免疫細(xì)胞抗腫瘤能力。
　　 結(jié)果:1)磁珠分選后活細(xì)胞率>98％,B細(xì)胞純度達(dá)到97.86％±0.0090,細(xì)胞回收率達(dá)到92.24％±0.0041；2)多種細(xì)胞因子輔助下B細(xì)胞體外擴(kuò)增效果不同,IL-2組,IL-2+IL-4組和IL-2+IL-4+BAFF聯(lián)合組細(xì)胞擴(kuò)增均明顯優(yōu)于對

4、照組(P<0.01),聯(lián)合組亦優(yōu)于IL-2組和IL-2+IL-4組(P<0.05),而IL-4組與對照組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；3)體外擴(kuò)增4天的B細(xì)胞表型檢測顯示,IL-4組、IL-2+IL-4組和IL-2+IL-4+BAFF聯(lián)合組的CD80比例明顯高于對照組(P<0.05),聯(lián)合組亦優(yōu)于IL-4組和IL-2+IL-4組(P<0.05),而IL-2組與對照組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)；4)ELISA檢測培養(yǎng)上清液中的IgG和IL-10發(fā)現(xiàn)IL

5、-2+IL-4+BAFF聯(lián)合組可以增強(qiáng)B細(xì)胞IgG和IL-10的分泌能力(P<0.01)；5)B細(xì)胞聯(lián)合CIK對腫瘤的殺傷明顯優(yōu)于DC聯(lián)合CIK組(P<0.001)。而不同培養(yǎng)方式的B細(xì)胞聯(lián)合CIK對腫瘤的殺傷效果不同,IL-2+IL-4組和IL-2+I1-4+BAFF聯(lián)合組均優(yōu)于對照組(P<0.001),聯(lián)合組亦優(yōu)于IL-2+IL-4組(P<0.01);
　　 結(jié)論:1)IL-2可以有效地促進(jìn)B細(xì)胞增殖,可以用于B細(xì)胞體外擴(kuò)增