BH3模擬物協(xié)同紫杉醇治療慢性粒細(xì)胞白血病(CML)的分子機(jī)制研究.pdf

1、碩士學(xué)位論文BH3模擬物協(xié)同紫杉醇治療慢性粒細(xì)胞白血病(CML)的分子機(jī)制研究ThemechanismofsynergyofBH3mimeticsandpaclitaxelinCnrOnlCmVeloldleUKemiall■學(xué)號(hào)：一三!坦翟塹大連理工大學(xué)DalianUniversityofTechnology大連理工大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要紫杉醇作為微管蛋白抑制劑，能夠克服CML中p53和Fas缺失導(dǎo)致的凋亡缺陷，通過內(nèi)源凋亡通路誘導(dǎo)慢性

2、粒細(xì)胞白血病(Chronicmyeloidleukaemia；CML)細(xì)胞凋亡。因此，紫杉醇可以作為治療CML的候選化療藥。內(nèi)源凋亡通路受Bcl2家族抗凋亡蛋白和促凋亡蛋白的相互作用平衡的調(diào)控，而CML細(xì)胞中異常激活的MAPK和STAT，能夠上調(diào)Bcl2家族抗凋亡蛋白Bcl一2、BclXL和Mcl1，抑制紫杉醇誘導(dǎo)的凋亡發(fā)生。因此，拮抗Bcl2家族抗凋亡蛋白的藥物，能夠與紫杉醇協(xié)同殺傷CML細(xì)胞。BH3模擬物利用小分子化學(xué)基團(tuán)模擬BH3

3、一only蛋白上重要的氨基酸殘基，占據(jù)Bcl一2家族抗凋亡蛋白的功能區(qū)：BH3溝槽，發(fā)揮抗腫瘤活性。ABT737是進(jìn)入臨床期的BH3模擬物之一，對Bcl2／BclXL的親和力比較強(qiáng)，但是不能結(jié)合Mcl1蛋白；我們課題組在前期研究中發(fā)現(xiàn)和證明了一個(gè)特異的BH3模擬物S1，能以高親和力結(jié)合Mcl1(Ki=58nM和Bcl2(Ki=310nM)兩個(gè)蛋白。本論文對比了ABT一737和S1聯(lián)合紫杉醇治療CML的作用，對BH3模擬物與紫杉醇的協(xié)同機(jī)

4、制進(jìn)行了分子水平的研究。首先以慢性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞系K562作為研究對象，通過MTT實(shí)驗(yàn)，根據(jù)聯(lián)合指數(shù)分析等方法證明，BH3模擬物和紫杉醇對K562細(xì)胞有協(xié)同殺傷作用(CI1)。通過檢測Caspase8／9酶原激活和細(xì)胞色素C的釋放證明，它們的協(xié)同作用是通過內(nèi)源性凋亡通路誘導(dǎo)K562細(xì)胞凋亡。通過Bcl2、BclXL和Mcl1RNA干擾實(shí)驗(yàn)，證明Mcl一1蛋白在BH3模擬物和紫杉醇協(xié)同作用中發(fā)揮了最關(guān)鍵的作用。Western免疫印記和免

5、疫共沉淀實(shí)驗(yàn)證實(shí)，ABT737和S1通過不同的分子機(jī)制，協(xié)同紫杉醇拮抗Mcl—l蛋白：ABT737通過上調(diào)Bim蛋白水平，解離Mcl1／Bak二聚體，協(xié)同紫杉醇誘導(dǎo)凋亡發(fā)生；Sl則通過直接結(jié)合Mcl1蛋白和直接干擾Mcl一1／Bim和Mcl1／Bak二聚體，協(xié)同誘導(dǎo)凋亡。進(jìn)一步通過聯(lián)合JNK抑制劑證明，JNK／Bim通路的激活是ABT737協(xié)同紫杉醇上調(diào)Bim的分子機(jī)制。之后，在三個(gè)白血病原代培養(yǎng)的病例中，ABT737、Sl與紫杉醇的協(xié)