PD-Ls及其受體PD-1在結(jié)外NK-T細(xì)胞淋巴瘤中的表達(dá)及免疫調(diào)節(jié)功能.pdf

1、背景
　　非霍奇金淋巴瘤(NHL)是起源于人類免疫系統(tǒng)的淋巴細(xì)胞及其前體細(xì)胞的惡性增生性疾病。結(jié)外NK/T細(xì)胞淋巴瘤(ENKTL)是非霍奇金淋巴瘤的一個亞型，到目前為止ENKTL尚無標(biāo)準(zhǔn)治療指南，其治療效果不佳，患者預(yù)后極差，因此尋找ENKTL新的最佳治療方案勢在必行。
　　目的
　　檢測PD-L1、PD-L2及其受體PD-1在結(jié)外NK/T細(xì)胞淋巴瘤(ENKTL)細(xì)胞株（SNK-6和YTS）和組織病理切片中的表達(dá)水平，

2、探討PD-Ls/PD-1信號途徑在ENKTL中的免疫調(diào)節(jié)作用。
　　方法
　　采用免疫磁珠法從健康志愿者外周血中分選正常NK細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞;用實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)（Real-timefluorescencequantitativePCR或qRT-PCR）檢測ENKTL細(xì)胞株SNK-6、YTS中PD-L1和PD-L2mRNA的表達(dá)水平，以正常NK細(xì)胞為對照;免疫組化SP法檢測30例不同分期ENKTL組織和18例鼻炎組織

3、中PD-L1、PD-L2及PD-1蛋白的表達(dá)水平，并分析其與臨床病理組織學(xué)參數(shù)之間的關(guān)系;運(yùn)用流式細(xì)胞學(xué)(flowcytometry，F(xiàn)CM)檢測20例ENKTL患者和10例健康志愿者外周血CD4+和CD8+T細(xì)胞表面PD-1的表達(dá)水平;體外功能實(shí)驗建立SNK-6和PHA刺激活化的CD8+T細(xì)胞的共培養(yǎng)體系，分析加入抗PD-L1抗體前后PD-L1/PD-1途徑在ENKTL腫瘤免疫中的功能意義。
　　結(jié)果
　　1.ENKTL細(xì)

4、胞株SNK-6及YTS中PD-L1和PD-L2mRNA的表達(dá)水平明顯高于正常NK細(xì)胞，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。PD-1在ENKTL患者外周血CD4+和CD8+T淋巴細(xì)胞中的表達(dá)水平明顯高于健康志愿者(P＜0.05)，且隨著化療周期的進(jìn)行PD-1的表達(dá)逐漸下降。ENKTL組織中腫瘤細(xì)胞PD-L1和PD-L2表達(dá)的陽性率(60.0％(18/30)、63.3％(19/30))，明顯高于鼻炎組織(22.2％(4/18)、16.7％

5、(3/18))，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　2.ENKTL中PD-1+TIL與PD-L1、PD-L2的表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)(P＜0.05)。PD-L1和PD-L2蛋白的表達(dá)水平與臨床分期均呈正相關(guān)(P＜0.05)。PD-L1與LDH、Ki-67水平均呈正相關(guān)(P＜0.05)，與IPI評分則呈負(fù)相關(guān)(P＜0.05)。而PD-L2與IPI評分、LDH及Ki-67水平均無顯著相關(guān)性(P＞0.05)。然而PD-L1和PD-L2

6、的表達(dá)水平與其他病理學(xué)參數(shù)（如性別、年齡、β2-MG水平）均無顯著相關(guān)性(P＞0.05)。
　　3.在功能實(shí)驗中，PD-L1/PD-1對SNK-6的增殖及CD8+T淋巴細(xì)胞的凋亡無明顯抑制效應(yīng);但明顯抑制CD8+T細(xì)胞Th1型細(xì)胞因子(IL-2、IFN-r)的產(chǎn)生，加入抗PD-L1阻斷抗體后恢復(fù)其細(xì)胞因子產(chǎn)生能力。
　　結(jié)論
　　1.PD-Ls及其受體PD-1在ENKTL中高表達(dá)且具有一定的臨床意義。
　　2.P