MiR--21--5p和MiR--150--5p在結(jié)外NK-T細(xì)胞淋巴瘤組織中的表達(dá)及臨床意義.pdf

1、目的:
　　腫瘤，作為嚴(yán)重威脅人類健康并且影響人類生活質(zhì)量的疾病之一，是臨床科研工作者一直研究探索的重點(diǎn)項(xiàng)目，腫瘤分為良性腫瘤及惡性腫瘤，其中惡性腫瘤尤其影響人類生命。淋巴瘤作為一種起源于淋巴結(jié)以及淋巴結(jié)外的淋巴組織惡性腫瘤，在兒童、年輕人好發(fā)腫瘤中是最常見的惡性腫瘤之一。世界衛(wèi)生組織(WHO)淋巴瘤分類中定義各種類型的淋巴瘤都應(yīng)該具有其獨(dú)立的組織病理學(xué)特點(diǎn)、免疫表型、分子遺傳學(xué)以及臨床表現(xiàn)。淋巴瘤定義為兩大類，即霍奇金淋巴瘤和非

2、霍奇金淋巴瘤。在2016年WHO更新版的造血與淋巴組織腫瘤分類中，非霍奇金淋巴瘤的包括60余種不同種類，其被認(rèn)為是所有腫瘤中分類最為復(fù)雜的類型。結(jié)外NK/T細(xì)胞淋巴瘤(Extranodal NK/T cell lymphoma，ENKTCL)是一種罕見的并且具有侵襲性的非霍奇金淋巴瘤亞型，其與潛在Epstein Barr病毒(EBV)感染密切相關(guān)，此類型淋巴瘤具有較強(qiáng)的侵襲性，并且預(yù)后不良，主要發(fā)生于亞洲和拉丁美洲的國家，其是我國淋巴瘤

3、最常見的亞型之一。針對(duì)傳統(tǒng)的蒽環(huán)類化療作用，結(jié)外NK/T細(xì)胞淋巴瘤與其他類型的淋巴瘤相對(duì)比，在治療方面上其具有較強(qiáng)的抵抗力。目前，因結(jié)外NK/T細(xì)胞淋巴瘤的惡性程度高，侵襲性強(qiáng)，對(duì)人類生命的威脅程度高，在標(biāo)準(zhǔn)化治療方法上還沒有統(tǒng)一的認(rèn)定，因此研究結(jié)外NK/T細(xì)胞淋巴瘤的發(fā)生發(fā)展機(jī)制，相關(guān)預(yù)后指標(biāo)或者尋找其新的治療靶點(diǎn)具有著重要的意義。
　　微小RNA（microRNA，miRNA）是小的非編碼RNA，由18-25個(gè)核苷酸組成，通過

4、幾種不同機(jī)制來發(fā)揮作用，可以在轉(zhuǎn)錄后水平對(duì)靶基因起到負(fù)性調(diào)控的作用，它們?cè)谡{(diào)節(jié)細(xì)胞的生長(zhǎng)、發(fā)育、凋亡、侵襲、轉(zhuǎn)移和造血過程中發(fā)揮著重要的生物學(xué)作用。MiRNA通過阻止mRNA的翻譯或者調(diào)節(jié)mRNA的降解來調(diào)控靶基因表達(dá)，每個(gè)類型的細(xì)胞miRNA類型及表達(dá)情況各不相同，因此可以將miRNA作為靶細(xì)胞的標(biāo)記物。因此，檢測(cè)并分析miRNA在腫瘤細(xì)胞中的類型及表達(dá)量可以作為淋巴瘤治療及分析預(yù)后的重要指標(biāo)。
　　MiR-21-5p是由miR

5、-21前體的5'端臂加工而來的，人類miR-21基因位于染色體17q23.2正鏈。腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中包括很多miRNA的改變，其中就涉及miR-21-5p，其表達(dá)與部分腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移具有明確的相關(guān)性。例如，研究表明，高表達(dá)的miR-21-5p可以在非小細(xì)胞癌中調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)能力、浸潤(rùn)以及轉(zhuǎn)移;同樣，低表達(dá)的miR-21-5p可以降低腫瘤細(xì)胞中相關(guān)蛋白的表達(dá)水平。MiR-150-5p是由miR-150前體的5'端臂加工而來的，

6、根據(jù)相關(guān)研究證據(jù)表明，miR-150-5p在某些腫瘤發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要的作用，其中就包括淋巴造血系統(tǒng)腫瘤。miR-150家族在惡性和正常的B細(xì)胞中可以調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄因子叉頭型基因P1(Forkhead box p2，F(xiàn)OXP1)和接頭蛋白GAB1蛋白的表達(dá)水平，同時(shí)可以影響B(tài)CR信號(hào)通路。研究表明，其被認(rèn)為有著促進(jìn)胃癌細(xì)胞增殖的作用，也被認(rèn)為在骨肉瘤中有超過正常組織中表達(dá)量50倍的過度表達(dá)情況。
　　根據(jù)已發(fā)表文獻(xiàn)顯示，miR-21-

7、5p和miR-150-5p在腫瘤中發(fā)揮著重要的作用，目前在關(guān)于結(jié)外NK/T細(xì)胞淋巴瘤的相關(guān)文獻(xiàn)中并沒有關(guān)于miR-21-5p和miR-150-5p的具體研究。因此，本課題將miR-21-5p和miR-150-5p應(yīng)用于結(jié)外NK/T細(xì)胞淋巴瘤的研究，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Quantitative Real-time PCR，qRT-PCR)檢測(cè)miR-21-5p和miR-150-5p在NK/T細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞中的表達(dá)情況以及采用原位雜交技

8、術(shù)(In situ hybridization，ISH)檢測(cè)miR-21-5p和miR-150-5p在結(jié)外NK/T細(xì)胞淋巴瘤組織中的表達(dá)情況，結(jié)合相關(guān)臨床病理參數(shù)以及預(yù)后指標(biāo)分析探討其在結(jié)外NK/T細(xì)胞淋巴瘤中所發(fā)揮的關(guān)鍵性作用，尋找與其治療相關(guān)作用的新靶點(diǎn)，為臨床上患者的治療提供有效的幫助。
　　方法:
　　1.miR-21-5p和miR-150-5p在NK/T細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞系中的表達(dá)情況由生工生物工程股份有限公司設(shè)計(jì)合成

9、miR-21-5p和miR-150-5p的特異性引物，內(nèi)參是U6特異性引物，利用qRT-PCR檢測(cè)人類正常NK細(xì)胞以及NK/T細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞系NK92和YT中miR-21-5p和miR-150-5p的表達(dá)量。
　　2.miR-21-5p和miR-150-5p在結(jié)外NK/T細(xì)胞淋巴瘤石蠟切片組織中的表達(dá)及臨床意義
　　2.1.收集并篩選結(jié)外NK/T細(xì)胞淋巴瘤的石蠟組織標(biāo)本40例，以20例鼻腔粘膜慢性炎的標(biāo)本作為對(duì)照組織。

10、>　　2.2.采用原位雜交法檢測(cè)結(jié)外NK/T細(xì)胞淋巴瘤標(biāo)本組織及對(duì)照組織鼻腔粘膜慢性炎的標(biāo)本組織中miR-21-5p和miR-150-5p相對(duì)表達(dá)量。
　　2.3.用SPSS21.0軟件對(duì)miR-21-5p和miR-150-5p表達(dá)與結(jié)外NK/T細(xì)胞淋巴瘤患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，包括年齡、性別、B癥狀、血清LDH水平、Ann Arbor臨床分期及IPI評(píng)分。
　　2.4.單因素及多因素分析miR-21-5p和m

11、iR-150-5p表達(dá)與以上臨床病理參數(shù)及患者臨床預(yù)后的相關(guān)性。
　　結(jié)果:
　　1.miR-21-5p和miR-150-5p在NK/T細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞株NK92及YT中的表達(dá)與人類正常NK細(xì)胞株比較，表達(dá)量明顯上調(diào)。
　　2.與對(duì)照組鼻腔粘膜慢性炎相比，結(jié)外NK/T淋巴瘤組織中的miR-21-5p和miR-150-5p的表達(dá)水平明顯增高。
　　3.miR-21-5p的表達(dá)水平與患者年齡、性別、血清LDH水平、B癥

12、狀、Ann Arbor臨床分期以及IPI評(píng)分無關(guān)(P＞0.05)。miR-150-5p的表達(dá)水平與患者的IPI評(píng)分有關(guān)(P＜0.05)，而與患者年齡、性別、血清LDH水平、B癥狀以及Ann Arbor臨床分期無關(guān)(P＞0.05)。
　　4.miR-21-5p和miR-150-5p的表達(dá)與患者總生存率無明顯相關(guān)性(P＞0.05)，IPI評(píng)分（≥2分）可能為患者預(yù)后不良的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。
　　結(jié)論:
　　1.miR-21-5