重組人促紅細(xì)胞生成素聯(lián)合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療膿毒癥大鼠心肌損傷的實驗研究.pdf

1、目的：本實驗旨在通過研究骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植聯(lián)合EPO治療膿毒癥大鼠心肌損傷，觀察其對心肌細(xì)胞病理學(xué)改變及細(xì)胞凋亡的影響，探討EPO聯(lián)合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植對膿毒癥大鼠心肌細(xì)胞凋亡的抑制作用及可能的分子生物機(jī)制，從而為臨床治療膿毒癥相關(guān)性心肌損傷提供新思路。
　　方法：模型建立：SD大鼠50只，雌雄不拘，隨機(jī)分為5組，每組各10只，應(yīng)用盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)建立膿毒癥模型。單純干細(xì)胞移植組（SC）、單純促紅細(xì)胞生成素組（EPO）、EPO聯(lián)

2、合SC組（EPO+SC）、膿毒癥組（CLP），假手術(shù)組（sham）。SC組建模后尾靜脈輸注異體間充質(zhì)干細(xì)胞。EPO+SC組建模后立即腹腔內(nèi)注射EPO1000IU/kg并尾靜脈輸注異體間充質(zhì)干細(xì)胞。EPO組模型復(fù)制后立即腹腔內(nèi)注射EPO1000IU/kg，尾靜脈輸注相同容量的生理鹽水。CLP組行盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)，sham組開腹后不做任何處理，后僅尾靜脈輸注相同容量的生理鹽水。檢驗指標(biāo)：24小時后麻醉處死實驗動物，取心肌標(biāo)本。采用蘇木精-依紅

3、（HE）染色觀察心肌組織形態(tài)；采用TUNEL染色方法檢測心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)；用Western-blot方法檢測心肌組織中凋亡蛋白Bax、Caspase-3，抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)量。
　　結(jié)果：HE染色：sham組可見心肌細(xì)胞排列整齊，心肌細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整；control組可見廣泛心肌纖維斷裂，排列紊亂，心肌細(xì)胞腫脹或皺縮，可見空泡變性;心肌間質(zhì)血管充血、水腫，炎癥細(xì)胞浸潤；EPO組與SC組心肌梗死區(qū)心肌組織相似，炎性細(xì)胞浸潤情況較

4、輕，期間散在分布正常心肌細(xì)胞；EPO+SC組心肌細(xì)胞損害較輕，間質(zhì)充血不明顯，少量炎癥細(xì)胞浸潤。TUNEL結(jié)果：EPO+SC組凋亡指數(shù)顯著低于CLP組（37.93±12.60％vs75.70±15.50%，p＜0.01），EPO組凋亡指數(shù)與EPO+SC組相比較高（54.08±16.06%vs37.93±12.60%，p=0.047），EPO組與SC組凋亡指數(shù)均低于CLP組（p＜0.01）。Western blot結(jié)果：EPO+SC組Bc