棘球蚴自然抗原和卡介苗對Th1-Th2轉錄因子和細胞因子的影響.pdf

1、目的：模擬自然環(huán)境下泡球蚴感染的過程，通過觀察Th1/Th2關鍵轉錄因子（T-bet和GATA-3）和其標志性細胞因子在卡介苗和棘球蚴自然抗原免疫及免疫后再用泡球蚴原頭蚴攻擊感染昆明鼠模型的表達水平，探討包蟲病感染對中間宿主的抗感染免疫和免疫病理反應在不同情況下的調節(jié)機制，并評估其對宿主細胞免疫反應的影響。
　　方法：建立昆明小鼠動物模型：用實驗室常規(guī)制備的含0.1mg/ml蛋白的單房棘球蚴囊液抗原和泡球蚴組織提取抗原以皮下注射的

2、方法免疫昆明小鼠，初始免疫量為0.2mg/每只，每一個月加強免疫量為0.1mg/每只。用市售的卡介苗（BCG）免疫方法同前（0.05mg/每只注射）。取一半的免疫后小鼠作泡球蚴原頭蚴的攻擊感染，感染方采用腹腔內注射2000個原頭蚴（PBS稀釋）。上述所有組各為20只鼠，雌雄各半。設PBS注射的空白對照和不作免疫的感染對照。各組10只雌雄各半。動物模型的處理和標本的收集：攻擊感染四個月后，所有的鼠用乙醚麻醉處死前取血，然后立即取肝脾臟放入

3、RNALater保存液中。處死后記錄一般狀況并檢查個器官狀態(tài)和感染病灶的分布，大小等情況；所取得的標本放置于-800C備用。用實時定量聚合酶鏈反應（qRT-PCR）檢測脾組織中GATA-3及T-bet的mRNA表達水平；酶聯免疫吸附法檢測血清中白介素4（IL-4）、γ干擾素（IFN-γ）、白介素2（IL-2）、白介素6（IL-6）、粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子（GM-CSF）、白介素10（IL-10）和白介素17（IL-17）的含量。所

4、有的數據結果用SPSS軟件做單因素相關分析，并對比個各組間轉錄因子和細胞因子的表達量均數差別的顯著性檢驗。
　　結果：泡球蚴攻擊感染的小鼠在感染20天后，腹外可看到小米粒大的包囊，之后，腹腔逐步膨隆，活動減弱，毛發(fā)稀疏。同時出現互相撕咬現象，個別小鼠咬頭，有些小鼠出現哮喘等過敏樣癥狀，多數小鼠尿道口紅腫，導致尿道水腫，排尿不暢，解剖發(fā)現膀胱充盈，腎臟灰白色，未做任何處理，很快死亡。所有實驗鼠包括正常對照，感染對照，免疫和免疫后感染

5、鼠模型的成活率為73％（102/140）并且各感染組病灶的大小和重量比較的差異無顯著意義；Th1/Th2關鍵轉錄因子和細胞因子在血清中的表達量檢測結果顯示：比較CE免疫組、AE免疫組、卡介苗免疫組、感染對照組、CE免疫攻擊組和AE免疫攻擊組與PBS對照組小鼠的轉錄因子（GATA-3mRNA和T-betmRNA）和其標志性細胞因子（INF-γ及IL-4）以及其它細胞因子包括GM-CSF、IL-2、IL-6、IL-10和IL-17的表達量，

6、差異均無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。比較卡介苗免疫攻擊組與PBS對照組的轉錄因子（T-betmRNA）和其標志性細胞因子（INF-γ）以及其它Th1/Th17型的細胞因子(GM-CSF、IL-2和IL-17)的表達量，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。而比較卡介苗免疫攻擊組與PBS對照組及感染對照組的轉錄因子（GATA-3mRNA）和其標志性的細胞因子(IL-4)和其它Th2細胞因子(IL-6和IL-10)的表達量，差異無統(tǒng)計學意義（P

7、>0.05）?？ń槊缑庖吖艚MT-betmRNA的表達量與IFN-γ成正相關（r=0.71，P<0.05）。
　　結論：Th1/Th2細胞免疫反應在泡球蚴感染的昆明鼠動物模型宿主體內可以長期共同存在處于平衡狀態(tài)，反映了宿主對泡球蚴產生的抗感染免疫和由寄生蟲抗原誘導宿主產生的免疫病理反應的相互作用和相互適應的復雜調節(jié)過程。實驗證明卡介苗（BCG）有上調Th1型免疫反應的作用,用BCG可以干預或治療由泡球蚴抗原誘導的晚期泡球蚴(AE)