抗核小體抗體在系統(tǒng)性紅斑狼瘡中的診斷意義及表達特異性膜抗體的B細胞系的建立.pdf

1、本論文分為三個部分，第一部分是抗核小體抗體和兒童系統(tǒng)性紅斑狼瘡的相關(guān)性研究。系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)是一種全身性自身免疫病，本病的病理過程中伴有明顯的B淋巴細胞的活化?；颊哐逯锌沙霈F(xiàn)多種自身抗體，并因此導(dǎo)致組織和器官的損傷。自身抗體包括：DNA，組蛋白，非組蛋白和核小體等。核小體是SLE的自身免疫原，是多種抗核抗體出現(xiàn)的根源。我們檢測了52例SLE兒童的血清，其中18例抗核小體抗體(AnuA)陽性。27例疾病對照組中1例AnuA陽性，

2、30例正常對照組AnuA均為陰性。AnuA在兒童SLE中的敏感性為34.6％，特異性為96.3％?？筪sDNA抗體、抗心磷脂抗體陰性的SLE患兒AnuA陽性率分別為33.3％和25％。因此AnuA對兒童SLE的診斷具有較高的特異性，有助于抗dsDNA抗體、抗心磷脂抗體陰性的兒童SLE的診斷。 第二部分是用EB病毒轉(zhuǎn)化人外周血B淋巴細胞，從而建立自身免疫病細胞系。同SLE一樣，重癥肌無力(MG)也是自身免疫性疾病，MG主要累及神經(jīng)

3、肌肉接頭處突觸后膜上AchR，早期或晚期重癥肌無力患者中85％-90％為AchR抗體陽性。本實驗采用可向培養(yǎng)基中釋放EB病毒顆粒的B95-8細胞上清轉(zhuǎn)化人外周血B淋巴細胞，體外建立了SLE和MG兩種自身免疫病的永生化淋巴母細胞系(LCL)。進一步，我們將轉(zhuǎn)化后的B淋巴細胞用半固體培養(yǎng)基將細胞克隆化培養(yǎng)，以期篩選出可以表達膜自身抗體的B細胞系。但是，由于病理性B細胞在整個B細胞庫中所占比例過少，同時又由于患者血樣較難采集，無法對更多血樣進

4、行轉(zhuǎn)化，因此，沒有通過EB病毒轉(zhuǎn)化的方法得到表達膜自身抗體的B細胞系。 在第三部分工作中，我們用實驗性重癥肌無力造模的大鼠和小鼠為B細胞來源，尋找表達膜自身抗體的B細胞。應(yīng)用雜交瘤技術(shù)，我們建立了大鼠骨髓和脾細胞融合的雜交瘤細胞株以及小鼠脾融合的雜交瘤細胞株，通過SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳、流式細胞術(shù)、WesternBlotting、質(zhì)譜分析等方法證明了雜交瘤細胞既可以分泌抗體又可以表達膜抗體，這種特性是在細胞與骨髓瘤細胞融合后獲