系統(tǒng)性紅斑狼瘡血漿microRNA的表達(dá)及意義.pdf

1、目的:
　　 篩選并驗(yàn)證系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)特異相關(guān)的血漿miRNAs，并分析其表達(dá)的臨床意義，以期為SLE的診斷及干預(yù)治療提供了一條新的線(xiàn)索。
　　 方法:
　　 1.標(biāo)本收集:48個(gè)病例來(lái)自于2011年3月-2011年9月由溫州醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院風(fēng)濕免疫科收治確診的SLE病人，女性43例，男性5例，年齡14-70歲，中位年齡34歲，所有病例均符合美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)1997年修訂的系統(tǒng)性紅斑狼瘡診斷標(biāo)準(zhǔn)，疾病活

2、動(dòng)度評(píng)估采用SLE病情活動(dòng)評(píng)分(SLEDAI評(píng)分)。20例正常對(duì)照標(biāo)本取自同時(shí)期健康體檢者，年齡及性別與SLE患者匹配。
　　 2.將血漿標(biāo)本送至公司進(jìn)行miRNA基因芯片分析，建立血漿miRNAs表達(dá)譜，根據(jù)芯片結(jié)果，從中挑選表達(dá)差異大于1.5倍的3條miRNA以及miR-16進(jìn)行后續(xù)分析。
　　 3.設(shè)計(jì)miRNA定量PCR分析引物，并驗(yàn)證其特異性。
　　 4.定量PCR檢測(cè)SLE患者及正常人血漿中miR-1

3、6、miR-29a、miR-199a-5p、miR-195的表達(dá)水平。
　　 5.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理miRNA表達(dá)與SLE臨床病理相關(guān)性。采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。正態(tài)分布數(shù)據(jù)采用t檢驗(yàn)（兩組間）或方差分析（兩組或兩組以上）進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，非正態(tài)分布數(shù)據(jù)采用秩和檢驗(yàn)比較，兩組間的相關(guān)性分析用Pearson法分析，取P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果:
　　 1.建立了SLE病人血漿中的miRNAs基因表達(dá)譜，

4、與健康人相比，初步篩選出了24條表達(dá)差異的miRNAs基因。
　　 2.利用PCR技術(shù)，經(jīng)驗(yàn)證利用特異性引物，可以特異地檢測(cè)出血漿miR-16、miR-29a、miR-199a-5p、miR-195的表達(dá)。
　　 3.根據(jù)miR-16檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，12.4～25.8的Ct值屬于線(xiàn)性檢測(cè)范圍，在此區(qū)間可用Ct值比較組別間表達(dá)差異。
　　 4.SLE病人和正常對(duì)照組血漿中miR-16的表達(dá)水平（Ct值）分別為19.

5、40±0.85和18.89±0.66，和健康人相比，miR-16在SLE患者血漿中表達(dá)下調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。血漿miR-16表達(dá)水平與病人臨床病理資料相關(guān)性分析所示，血漿miR-16表達(dá)水平（Ct值）與病人SLEDIA評(píng)分（r=0.313，P=0.03）及24小時(shí)尿蛋白量(r=0.323，P=0.04)正相關(guān)。ROC曲線(xiàn)分析顯示，miR-16判定SLE患者陽(yáng)性蛋白尿的曲線(xiàn)下面積(AUC)為0.711(95％CI:0.5

6、42-0.879)，其判定的敏感性和特異性分別達(dá)92％和46％。另外血漿中miR-16的表達(dá)水平與病人的年齡、性別、CRP、ALT、C3、IgG等無(wú)顯著相關(guān)性(P＞0.05)。
　　 5.miR-29a在SLE病人血漿中表達(dá)上調(diào)，和健康人相比差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（22.49±1.17比23.59±0.61，P＜0.01）。相關(guān)性分析顯示，血漿中miR-29a的表達(dá)水平與病人的年齡、性別、SLEDAI評(píng)分、CRP、ALT、C3、I

7、gG等無(wú)顯著相關(guān)。血漿miR-29a表達(dá)水平（Ct值）與循環(huán)中抗核抗體呈負(fù)相關(guān)(r=-0.341，P=0.021)，miR-29a與血小板計(jì)數(shù)(r=-0.406，P=0.004)、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)(r=-0.272，P=0.051)、淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)（r=-0.342，P=0.017）呈負(fù)相關(guān)。ROC曲線(xiàn)分析顯示，miR-29a判定SLE患者血小板減少的曲線(xiàn)下面積(AUC)為0.74(95％ CI:0.536-0.943)，其判定的敏感性和特異性

8、分別達(dá)72％和64％。
　　 6.miR-199a-5p、miR-195在SLE患者及健康人血漿中表達(dá)水平無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。
　　 結(jié)論:
　　 1.血漿miR-16在SLE中表達(dá)下調(diào)，血漿miR-29a在SLE中表達(dá)明顯上調(diào)，與健康人相比，miR-199a-5p、miR-195在SLE患者表達(dá)水平無(wú)顯著性差異，提示miR-16、miR-29a參與了SLE疾病的發(fā)生、發(fā)展。
　　 2.SLE疾