吲哚菁綠近紅外線熒光成像用于肝外膽道造影的研究.pdf

1、【背景及目的】術(shù)中定位膽管、避免其損傷是每個(gè)外科醫(yī)生都必須面對(duì)的問題。但是在許多情況下，如手術(shù)區(qū)炎癥或粘連較重時(shí)，術(shù)中準(zhǔn)確定位膽管往往很困難。今年來(lái)術(shù)中X線膽管造影被用于臨床，但它仍具有很多不足之處。因此需要探索一種安全、快捷、高分辨率的成像方法，可以提供術(shù)中實(shí)時(shí)的膽管影像，幫助醫(yī)生定位膽管、避免損傷。本實(shí)驗(yàn)旨在探索吲哚菁綠近紅外熒光成像的特點(diǎn)、機(jī)制及其用于術(shù)中實(shí)時(shí)膽道造影的可行性和其臨床應(yīng)用價(jià)值。
　　【方法】吲哚菁綠分別加入雙

2、蒸水、10％胎牛血清、和膽汁中，再加上單純血清和膽汁和蒸餾水共6組溶液分別用紫外-可見光光度儀檢測(cè)吸收光譜，再將前三組用熒光分光光度儀檢測(cè)發(fā)射光譜；臨床上收集患者膽汁，用BCA法測(cè)定不同膽汁樣本蛋白濃度；將膽汁進(jìn)行凝膠蛋白電泳后考馬斯亮藍(lán)法染色，以明確膽汁中蛋白質(zhì)的存在及條帶分布情況；經(jīng)大鼠靜脈注射ICG溶液后，動(dòng)態(tài)觀察并記錄肝外膽管、膽管周圍組織、下腔靜脈及門靜脈的變化并進(jìn)行熒光強(qiáng)度定量測(cè)定，繪制熒光強(qiáng)度變化曲線和信噪比（SBR）變化

3、曲線；構(gòu)建術(shù)中大鼠膽管急性狹窄和膽管急性損傷模型以模擬臨床術(shù)中膽管損傷的情景，分別給予兩組大鼠靜脈注射ICG后觀察其用于診斷術(shù)中膽管損傷的效果。
　　【結(jié)果】經(jīng)檢測(cè)ICG在血清中的吸收光譜區(qū)間為600～900nm，最高吸收峰在800nm左右，發(fā)射光譜區(qū)間為780～900nm，發(fā)射峰值在830nm波長(zhǎng)附近；ICG在膽汁中的吸收光譜區(qū)間為600～900nm，最高吸收峰在805nm，發(fā)射光譜區(qū)間為780～900nm，發(fā)射峰在840nm；

4、ICG在蒸餾水中的吸收光譜區(qū)間為600～900nm,吸收峰在770nm波長(zhǎng)附近，無(wú)明顯發(fā)射區(qū)間及峰值。2組膽汁樣本檢測(cè)蛋白濃度分別為5.2mg/ml和7.9mg/ml，蛋白電泳及考染結(jié)果顯示6條主要蛋白條帶，分子量在15KDa、30KDa、40KDa、55KDa、100KDa、170KDa左右；動(dòng)態(tài)膽管熒光成像及定量檢測(cè)的結(jié)果顯示靜脈注射ICG2min后肝外膽管開始顯影并熒光逐漸增強(qiáng)，8min熒光強(qiáng)度及SBR達(dá)峰值，后熒光強(qiáng)度逐漸減弱至

5、50min時(shí)停止觀察；5～35min內(nèi)，SBR＞2時(shí)，肝外膽管可以清晰的顯影并能與門靜脈、膽管周圍組織有很好的分辨；急性膽管狹窄與損傷模型的熒光成像結(jié)果顯示術(shù)中吲哚菁綠膽管成像能清楚顯示膽管狹窄及損傷部位，有利于術(shù)中及時(shí)診斷及治療。
　　【結(jié)論】1、吲哚菁綠的生物學(xué)和光學(xué)特性適合用于膽管熒光成像；2、吲哚菁綠可能是通過(guò)與膽汁中蛋白質(zhì)結(jié)合而具有發(fā)射近紅外熒光特性；3、ICG注射后2min膽管即可顯影，在5-35min可提供穩(wěn)定清晰的