牛分枝桿菌BCG菌株3-甲基腺嘌呤糖基化酶AAG的調(diào)控機制研究.pdf

1、堿基切除修復(BER)是生物體內(nèi)廣泛存在的一種DNA損傷修復機制，能夠使機體有效應(yīng)對各種內(nèi)源或外源因素引發(fā)的堿基損傷。3-甲基腺嘌呤DNA糖基化酶AAG能夠識別并切除受損堿基，在堿基切除修復系統(tǒng)中發(fā)揮重要作用。然而，作為引起結(jié)核病的結(jié)核分枝桿菌，其AAG的調(diào)控機制仍然不是很清楚。牛分枝桿菌BCG菌株（BacillusCalmetteGuerin，卡介苗菌株）在過去的七十多年里廣泛作為預防結(jié)核病的疫苗，是對抗結(jié)核病的重要武器，同時它與病原

2、菌結(jié)核分枝桿菌基因組具有高度同源性，因此被廣泛作為研究結(jié)核分枝桿菌基因調(diào)控的模式菌株。本研究綜合運用多種技術(shù)手段，重點研究了(B)CG菌株中AAG的雙重調(diào)控機制，主要包括以下內(nèi)容:
　　(1)通過細菌單雜交篩選發(fā)現(xiàn)和鑒定了一個TetR家族的轉(zhuǎn)錄因子BCG0878c，并進一步用EMSA和ChIP實驗證明BCG0878c能夠直接結(jié)合牛分枝桿菌aag基因（mbaag）的啟動子。運用實時定量PCR實驗和半乳糖苷酶實驗證明BCG0878c能

3、夠下調(diào)mbaag基因的表達，同時促進自身基因表達。用啟動子分段截短EMSA實驗和DNase(Ⅰ)足跡實驗進一步鑒定了BCG0878c所識別的保守DNA序列。
　　(2)采用細菌雙雜交、免疫共沉淀、表面等離子共振、pull-down等技術(shù)手段證明BCG0878c蛋白質(zhì)能夠與MbAAG相互作用。BCG0878c能夠促進MbAAG結(jié)合受損DNA，同時亦能促進MbAAG對受損堿基的切割。而MbAAG反過來能夠促進BCG0878c的DNA結(jié)