人結(jié)直腸腺癌預(yù)警和早期篩查的甲基化分子標(biāo)志物的研究.pdf

1、 目的：研究表明抑癌基因啟動(dòng)子區(qū)CpG島的甲基化導(dǎo)致抑癌基因表達(dá)失活是導(dǎo)致腫瘤發(fā)生的機(jī)制之一。本實(shí)驗(yàn)旨在通過研究結(jié)直腸腺癌、腺瘤患者及正常人中P16基因和Ras相關(guān)結(jié)構(gòu)域家族1A(RASSF1A)基因的啟動(dòng)子區(qū)的甲基化狀態(tài),并探討其臨床病理意義,為臨床應(yīng)用這些指標(biāo)預(yù)警、早期篩查結(jié)直腸腺癌及預(yù)測(cè)預(yù)后積累可靠資料。方法：收集結(jié)直腸腺癌、腺瘤患者及正常人外周血標(biāo)本,采用酚-氯仿法提取樣本 DNA,然后用巢式甲基化特異性PCR的方法檢測(cè)P16

2、基因和RASSF1A基因的啟動(dòng)子區(qū)的甲基化狀態(tài),并探討其與臨床病理參數(shù)的相關(guān)性。結(jié)果：1、結(jié)直腸腺癌組、腺瘤組、正常組外周血標(biāo)本中P16基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化陽性率分別是 45.45%(15/33)、34.48%(10/29)、12.5%(3/24) ,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=6.746,P<0.05)；結(jié)直腸腺癌組、結(jié)直腸腺瘤組、正常組 RASSF1A基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化陽性率分別是27.27%(9/33)、24.14%(7/29)、0%,

3、差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=7.709,P<0.05)。但是兩基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化陽性率在腺癌組與腺瘤組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.772,P>0.05；χ2=0.079, P>0.05)。2、結(jié)直腸腺癌組外周血標(biāo)本中P16基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化陽性率在高、中、低分化組中分別是 27.14%、56.25%、100%,顯示高、中分化組明顯低于低分化組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=7.622,P<0.05)；結(jié)直腸腺癌組外周血標(biāo)本中 RASSF1A 基

4、因啟動(dòng)子區(qū)甲基化陽性率在高、中、低分化組中分別為14.29%、25%、100%,顯示高、中分化組明顯低于低分化組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=9.232,P<0.01)。結(jié)直腸腺癌組外周血標(biāo)本中P16基因、RASSF1A基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化陽性率在不同性別、年齡、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、Dukes 分期間無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；腺瘤組外周血標(biāo)本中P16基因、RASSF1A基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化陽性率與性別、年齡等因素?zé)o相關(guān)性(P>0.05)。

5、3、P16與RASSF1A兩基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化狀態(tài)無相關(guān)性(P>0.05)。結(jié)論：1、P16基因與RASSF1A基因在結(jié)直腸腺腺癌組、腺瘤組中存在異常高甲基化,陽性率較正常組明顯增高,提示 P16 基因與RASSF1A基因的異常高甲基化可能參與結(jié)直腸腺癌的發(fā)生發(fā)展。2、在結(jié)腸腺瘤組P16基因與RASSF1A基因亦存在較高的表達(dá),與結(jié)腸腺癌組比較無明顯差異,提示P16基因與RASSF1A基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化可能是結(jié)直腸腫瘤發(fā)生的早期事件。3