乳腺癌中ABCG2、P-gp與淋巴細胞亞群的相關(guān)研究.pdf

1、近年來,乳腺癌的發(fā)病率呈逐年上升趨勢,手術(shù)、放療、化療及內(nèi)分泌治療仍是主要的治療方法,化療在治療中占重要地位,而蒽環(huán)類藥物又是乳腺癌化療藥物的基石之一。研究發(fā)現(xiàn)腫瘤的多藥耐藥直接影響到乳腺癌患者化療療效,成為化療失敗的重要難題。由多藥耐藥基因MDR1編碼的P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)高表達是產(chǎn)生多藥耐藥(Multidrugresistance,MDR)的主要原因之一,也是目前研究最為廣泛、深入且在臨床實踐中唯一得

2、到證實的耐藥機制。乳腺癌耐藥蛋白(Breastcancerresistanceprotein,BCRP/ABCG2)是最新發(fā)現(xiàn)的一種腫瘤多藥耐藥蛋白,與P-gp具有相同的底物:蒽環(huán)類藥物。ABCG2和P-gp高表達提示腫瘤對蒽環(huán)類藥物耐藥,化療時避免使用此類藥物,可使患者取得較好的療效,所以探討ABCG2、P-gp在乳腺癌中的表達不僅可以了解乳腺癌患者自身耐藥情況,還對術(shù)后應用化療藥物具有重要的指導作用。
　　包括乳腺癌在內(nèi),腫瘤

3、的發(fā)生和發(fā)展是一個非常復雜的過程,與機體免疫功能具有密切的關(guān)系。機體抗腫瘤免疫主要分為T淋巴細胞介導的細胞免疫和B淋巴細胞介導的體液免疫。腫瘤發(fā)生時,機體的抗腫瘤免疫會發(fā)揮一定的作用,CD4是輔助性T淋巴細胞表面抗原,CD8是抑制性T淋巴細胞表面抗原,CD19表達于B淋巴細胞表面抗原,CD56表達于NK細胞表面抗原。實驗室通過檢測T、B淋巴細胞亞群及NK的表達情況了解機體的免疫狀況。Ahmed等對早期造血細胞的研究表明,在體外ABCG2

4、可使原祖細胞增加,CD19+淋巴細胞的發(fā)育受損,降低移植小鼠B淋巴細胞數(shù)量;在體內(nèi)ABCG2增加部分祖細胞的比例和原始祖細胞群的數(shù)量,在早期造血過程中作為調(diào)節(jié)蛋白起到重要的作用。所以,研究乳腺癌中ABCG2表達與淋巴細胞亞群的關(guān)系具有一定的創(chuàng)新意義。
　　本研究采用免疫組織化學的方法檢測乳腺癌組織中ABCG2、P-gp的表達,同時應用流式細胞儀檢測乳腺癌患者血標本中淋巴細胞亞群的情況,結(jié)合臨床資料,分別探討乳腺癌患者機體的耐藥狀況

5、及免疫功能情況,并分析其相關(guān)性。
　　第一部分:乳腺癌組織中ABCG2、P-gp的表達
　　目的:
　　檢測乳腺癌耐藥蛋白(Breastcancerresistanceprotein,ABCG2/BCRP)和P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)在乳腺癌組織中的表達,探討兩者的相互關(guān)系及其與腫瘤生物學特征的關(guān)系。
　　方法:
　　免疫組織化學方法檢測85例乳腺癌和40例乳腺纖維腺瘤組織中ABC

6、G2、P-gp蛋白表達,并結(jié)合乳腺癌的臨床病理資料進行分析。
　　結(jié)果:
　　1.ABCG2蛋白的表達:ABCG2蛋白主要表達于腫瘤細胞的細胞膜及部分細胞質(zhì),乳腺纖維腺瘤中僅見少量陽性著色。乳腺癌組、乳腺纖維腺瘤組中ABCG2蛋白陽性表達率分別是43.5％、25.0%,兩組比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　2.P-gp蛋白的表達:P-gp蛋白主要表達于腫瘤細胞細胞膜,部分胞漿可以著色,極少數(shù)正常腺體上偶見微弱

7、的棕黃色胞漿著色。乳腺癌組、乳腺纖維腺瘤組中P-gp蛋白陽性表達率為34.1%、15.0%,兩組比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　3.ABCG2與乳腺癌臨床病理資料的關(guān)系
　　ABCG2蛋白表達與乳腺癌患者年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、AJCC定義的腫瘤分期無關(guān)(P>0.05),與腫瘤最大直徑有關(guān)(P<0.05)。腫瘤最大直徑大于2cm的乳腺癌患者ABCG2蛋白表達率(52.6%)明顯高于最大直徑小于2cm者(25.0%)(P

8、<0.05)。
　　4.P-gp與乳腺癌臨床病理資料的關(guān)系
　　P-gp蛋白表達與乳腺癌患者年齡、腫瘤最大直徑、AJCC定義的腫瘤分期無關(guān)(P>0.05),與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)。伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者中P-gp蛋白表達率(54.8%)明顯高于無轉(zhuǎn)移者(22.2%)(P<0.05)。
　　5.乳腺癌中ABCG2和P-gp的表達呈正相關(guān)關(guān)系(r=0.219,P<0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.

9、乳腺癌與乳腺纖維腺瘤組織比較,ABCG2和P-gp蛋白陽性表達增多,提示ABCG2或P-gp陽性對臨床選用敏感化療藥物及針對兩種蛋白的治療有指導意義。
　　2.ABCG2蛋白表達與乳腺癌腫塊最大直徑具有相關(guān)性,提示ABCG2與乳腺癌的惡性增殖有關(guān);而P-gp蛋白表達與乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有相關(guān)性,對臨床判斷乳腺癌患者的預后有一定的價值。
　　3.乳腺癌中ABCG2和P-gp蛋白呈正相關(guān),提示兩者表達可能存在相互促進,可能存在相

10、同的調(diào)解途徑并且調(diào)節(jié)方向相同。
　　第二部分:早期乳腺癌患者淋巴細胞亞群計數(shù)
　　目的:
　　檢測早期乳腺癌患者外周血T淋巴細胞亞群、B淋巴細胞亞群及NK細胞比值,探討早期乳腺癌患者免疫功能狀況及其臨床意義。
　　方法:
　　四色熒光標記流式細胞術(shù)對20例乳腺癌患者和42例健康體檢者(對照)外周血淋巴細胞亞群CD3+細胞、CD4+細胞、CD8+細胞、B細胞、NK細胞進行相對計數(shù),并對兩組結(jié)果進行比較分析。<

11、br>　　結(jié)果:
　　1.T淋巴細胞亞群計數(shù):早期乳腺組與對照組中CD3+細胞計數(shù)的平均值分別為76.44±6.07%、72.01±7.02%,兩者比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),CD4+/CD8+平均比值分別為1.99±1.16、1.42±0.89,兩者比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　2.B淋巴細胞亞群及NK細胞計數(shù):早期乳腺組與對照組中B淋巴細胞計數(shù)的平均值分別為9.39±3.51%、11.56±2.5

12、4%,兩者比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);NK細胞計數(shù)的平均值分別為7.80±4.42%、14.91±4.87%,兩者比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.早期乳腺癌組與健康人相比T淋巴細胞亞群中CD3+細胞計數(shù)升高,CD4+/CD8+比值升高,提示在乳腺癌早期機體細胞免疫功能紊亂,細胞免疫處于活躍狀態(tài)。
　　2.早期乳腺癌組與健康人相比B淋巴細胞亞群計數(shù)降低,提示在乳腺癌早期機體的體液免疫

13、功能下降;NK比值也下降,機體殺傷腫瘤的能力下降。
　　第三部分:晚期乳腺癌患者淋巴細胞亞群計數(shù)
　　目的:
　　檢測晚期乳腺癌患者外周血T淋巴細胞亞群、B淋巴細胞亞群及NK細胞比值,探討晚期乳腺癌患者免疫功能狀況及其臨床意義。
　　方法:
　　四色熒光標記流式細胞術(shù)對56例乳腺癌患者和42例健康體檢者(對照)外周血的淋巴細胞亞群CD3+細胞、CD4+細胞、CD8+細胞、B細胞、NK細胞進行相對計數(shù),并對兩

14、組結(jié)果進行比較分析。
　　結(jié)果:
　　1.T淋巴細胞亞群計數(shù):晚期乳腺癌組與對照組中CD4+細胞計數(shù)的平均值分別為34.32±11.25%、43.00±8.99%,兩者比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);CD8+細胞計數(shù)的平均值分別為34.33±13.29%、30.02±9.01%,兩者比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);CD4+/CD8+平均比值分別為1.21±0.71、1.42±0.89,兩者比較差異有統(tǒng)計學意義(P

15、<0.05)。
　　2.B淋巴細胞亞群及NK細胞計數(shù):晚期乳腺癌組與對照組中B淋巴細胞計數(shù)的平均值分別為8.18±6.81%、11.56±2.54%,兩者比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);NK細胞計數(shù)的平均值分別為13.95±11.50%、14.91±4.87%,兩者比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.晚期乳腺癌組與健康人相比T淋巴細胞亞群中CD8+細胞計數(shù)升高,CD4+細胞計數(shù)、CD4+/

16、CD8+比值下降,提示在乳腺癌晚期機體T淋巴細胞整體水平保持相對穩(wěn)定,但CD4+/CD8+比值失衡,機體細胞免疫處于下降趨勢。
　　2.晚期乳腺癌組與健康人相比B淋巴細胞亞群計數(shù)降低,提示在乳腺癌早期機體的體液免疫功能下降,且較細胞免疫更早的反應機體的免疫狀態(tài);NK比值無統(tǒng)計學意義。
　　第四部分:乳腺癌中ABCG2、P-gp表達與血標本淋巴細胞亞群的關(guān)系
　　目的:
　　檢測乳腺癌組織中ABCG2、P-gp蛋白

17、的表達和外周血標本T淋巴細胞亞群、B淋巴細胞亞群及NK細胞比值,探討其相關(guān)性和臨床意義。
　　方法:
　　1.免疫組織化學方法檢測20例乳腺癌組織中ABCG2、P-gp蛋白表達情況;
　　2.四色熒光標記流式細胞術(shù)檢測相同患者術(shù)前外周血T淋巴細胞亞群、B淋巴細胞亞群及NK細胞比值。
　　結(jié)果:
　　1.ABCG2與淋巴細胞亞群的關(guān)系
　　ABCG2蛋白表達與乳腺癌患者淋巴細胞亞群中CD4+淋巴細胞、C

18、D8+淋巴細胞、CD4+/CD8+比值和NK細胞比值無關(guān)(P>0.05),與CD3+淋巴細胞(r=-0.600)和B淋巴細胞計數(shù)(r=-0.503)有關(guān)(P<0.05)。
　　2.P-gp與淋巴細胞亞群的關(guān)系
　　P-gp蛋白表達與乳腺癌患者淋巴細胞亞群中CD3+淋巴細胞、CD4+淋巴細胞、CD8+淋巴細胞、CD4+/CD8+比值和B淋巴細胞計數(shù)無關(guān)(P>0.05),與NK細胞比值有關(guān)(r=0.471,P<0.05)。