硝酸銀對(duì)角朊細(xì)胞增殖的作用.pdf

1、目的:探討低濃度硝酸銀對(duì)體外培養(yǎng)角朊細(xì)胞增殖的影響。
　　 方法:建立HaCaT（人KC細(xì)胞株）角朊細(xì)胞的體外培養(yǎng)模型，分別于接種細(xì)胞貼壁后，隨機(jī)分為(1)對(duì)照組，不添加藥物試劑;(2) AgNO3一組，培養(yǎng)基中添加終濃度為1×10-5mol/l AgNO3;(3) AgNO3二組，培養(yǎng)基中添加終濃度為1×10-6mol/l AgNO3;(4) CFTRinh-172抑制劑組，培養(yǎng)液中添加終濃度為10umol/ml CFTRin

2、h-172溶液。每24h更換相應(yīng)藥物濃度的培養(yǎng)液。并在細(xì)胞貼壁后即刻、24h、36h、48h、72h、84h、96h進(jìn)行每組OD測(cè)量。24h及48h進(jìn)行MQAE染色，利用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)氯離子熒光含量，DAPI染色后，免疫熒光顯微鏡檢測(cè)。
　　 結(jié)果:HaCaT細(xì)胞接種2小時(shí)后，細(xì)胞沉降至培養(yǎng)板內(nèi)底部，各實(shí)驗(yàn)組間的基礎(chǔ)OD均值(P＞0.05)，隨后添加硝酸銀組較其他組OD值高(P＜0.05)，生長(zhǎng)曲線提示，添加硝酸銀實(shí)驗(yàn)

3、組HaCaT細(xì)胞呈指數(shù)生長(zhǎng)，約在72H后達(dá)生長(zhǎng)平臺(tái)期，較其他兩組有明顯促進(jìn)作用，添加終濃度為10umol/l的CFTRinh-172溶液實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞生長(zhǎng)較其他三組慢。添加不同濃度的AgNO3對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)有明顯的促進(jìn)作用，添加終濃度為10μmol/ml的CFTRinh-172溶液實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞生長(zhǎng)較其他三組慢(P＜0.05)。添加硝酸銀組中熒光強(qiáng)度明顯強(qiáng)于對(duì)照組及抑制劑組，說明細(xì)胞內(nèi)部Cl-含量明顯下降，48h后各組細(xì)胞內(nèi)熒光強(qiáng)度進(jìn)一步增強(qiáng)，提示

4、細(xì)胞內(nèi)氯離子外流增加。在無(wú)鈣改良RPMI1640培養(yǎng)液中添加不同濃度的AgNO3離體培養(yǎng)HaCaT細(xì)胞，其HaCaT細(xì)胞外流氯離子濃度明顯高于CFTRinh-172抑制劑組(P＜0.05)和對(duì)照組(P＜0.05);本實(shí)驗(yàn)中兩種濃度的AgNO3實(shí)驗(yàn)組沒有顯著性差異(P＞0.05); CFTRinh-172抑制劑組HaCaT細(xì)胞內(nèi)氯離子濃度明顯高于對(duì)照組(P＜0.05)。HaCaT細(xì)胞經(jīng)MQAE孵育染色及DAPI染色下，細(xì)胞漿呈淡綠色熒光反